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编号:1621018
红景天苷对海马神经元自然衰老的影响和机制研究
http://www.100md.com 2024年4月23日 中华养生保健 2024年第8期
端粒酶,原代,1材料与方法,1主要试剂和仪器,2原代海马神经元的培养,3原代海马神经元纯度鉴定,4原代海马神经元分组,5细胞活力测定,6SA-β-gal染色,7流式细胞术,8WesternBlot分析,9端粒酶活性
     徐新颖 朱 琳 刘姿杉 倪钦帅 于竹芹,3*

    (1.济南市济阳区中医院ICU科,山东 济南,251400;2.青岛大学医学部中西医结合中心,山东 青岛,266021;3.青岛市第六人民医院内科,山东 青岛,266023)

    机体发生衰老时会增加神经退行性疾病等多种疾病的发病风险[1]。海马神经元衰老与多种神经退行性疾病的发生密切相关[2]。研究表明,端粒酶缺乏的小鼠更容易发生衰老并伴随神经退行性变,出现海马神经元损伤,而重新提高端粒酶活性可以改善年龄相关的神经元损伤并延缓衰老[3]。《灵枢·天年》曰:人之寿,百岁而死。说明人若尽其天年可活到百岁,若能采取有效措施,可以延缓衰老的[4]。《本草纲目》中记载,红景天(rhodiolarosea)为“本经上品,祛邪恶气,补诸不足”,具有补气清肺、益智养心、理气养血等功效[5]。临床研究发现,红景天可以抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老和肝保护等作用[6-7]。现代药理研究表明,红景天的主要活性成分红景天苷(salidroside,Sal)对多种神经退行性疾病具有神经保护作用[8-9],但其对神经元衰老的影响及作用机制尚不十分明确。本研究通过分离和培养大鼠原代海马神经元,使其自然衰老,旨在探讨红景天苷对海马神经元衰老的作用和作用机制,为临床应用提供新的思路[10],现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器

    红景天苷(生产企业:上海阿拉丁生化科技公司,Sal,S101157,C14H20O7,300.31 Da);环黄芪醇(生产企业:上海麦克林生化科技公司,CAG,C864810,C30H50O5,490.71 Da);胰蛋白酶(25200056)、胎牛血清(FBS,10099141)、DMEM /F12培养基(11320082)、Neurobasal-A培养基(10888022)(生产企业:美国Gibco公司);细胞计数试剂盒(生产企业:北京索莱宝科技公司,CCK-8,CA1210);衰SA-β-gal染色试剂盒(生产企业:上海碧云天生物技术公司,C0602);兔抗鼠TERT抗体(生产企业:Novus Biologicals公司,NB100-317);端粒酶PCR-ELISA试剂盒(生产企业:德国罗氏公司,1185666910);荧光显微镜(ECLIPSE Ti2)、PCR仪(T100TM)(生产企业:Bio-Rad公司);酶标仪(生产企业:Bio-Tek公司,SYNERGYH1)。

    1.2 原代海马神经元的培养 ......

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