1.4 采用明胶酶谱法测定细胞上清液中的MMP的活性:常规方法制备含明胶2g/L(w/v)的8% 分离胶8%,浓缩胶5%。取上述细胞培养液,与等体积的2×SDS非还原加样缓冲液(100mmol/ L Tris_HCl,pH 6.8,4% SDS,0.2%溴酚蓝,20%甘油)在室温下混匀后直接点样,4℃条 件下恒压(120V)电泳至溴酚蓝走至凝胶底部。凝胶置2.5% Triton X_100中漂洗15min×2 次,浸入反应缓冲液(50mmol/L Tris_HCl,pH 8.0,50mmol/L NaCl,10mmol/L CaCl2 ),37℃孵育12h。取出凝胶,用0.5%考马斯亮蓝R250染色0.5h,脱色液(30%甲醇,10% 乙酸)脱色至蓝色背景下显现出清晰的白色条带为止。应用凝胶成像分析系统测定各条带的 平均吸光度(A值)及其面积, 以电泳条带的积分吸光度值代表酶活性进行定量分析,计算各 条带的积分V值 (V值=平均A值×面积)。

    1.5 研究对象及标本处理:总样本量220例,ACS患者115例,取自2007年1月至2008年6月 我院心内科住院患者,诊断标准参照中华医学会心血管分会2000年制定的“不稳定型心绞 痛(UA)诊断和治疗建议” ......