L—精氨酸和天然抗氧化剂对缺血性脑卒中防治作用的细胞和动物模型研究(2)
我们建立了氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)的细胞模型和小鼠的大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型来模拟体外脑缺血,研究了L-Arg和天然抗氧化剂搭配组合对脑卒中的防治作用。1 材料和方法
1.1 实验材料:L-Arg购自美国Sigma Chemical公司。山楂提取物、知母提取物和虾青素购自西安清乐生物科技有限公司。将精氨酸、山楂提取物、知母提取物和虾青素按一定比例混合,溶于蒸馏水中,以灌胃的方式喂食动物。
1.2 实验方法:细胞培养和处理:选取人的SH-SY5Y神经胶质瘤细胞,建立细胞的OGD模型来模拟体外脑缺血[6]。用无糖培养基,在无氧的条件下(95% N2+5% CO2)培养细胞。测试L-Arg、L-Arg和天然抗氧化剂搭配组合对细胞进行OGD培养的影响。利用MTT(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide)法测定细胞活力;采用DCF-DA检测细胞内活性氧ROS水平;采用Rhodamine123染色法测定线粒体膜电位;利用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;细胞内Bcl-2 ......
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