朱雪梅

    心肌缺血再灌注损伤的发生机制比较复杂，已有的研究认为与自由基损伤、钙离子超载、心肌纤维代谢障碍、血管内皮细胞损伤、中性粒细胞和细胞凋亡等诸多因素有关[1]。分子心血管病学研究已经证实，细胞凋亡参与心肌缺血再灌注损伤过程，是心肌细胞损伤的主要形式，其发生、发展受多种基因的调控[2]。本研究探讨曲美他嗪对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的治疗效果及对B细胞淋巴瘤/白血病_2基因(Bcl_2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶_3(Caspase_3)表达的影响，现将结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物：选取健康成年雄性SD大鼠48只，体重250～300g，由北京大学医学部实验动物科学部提供，许可证号SCXK(京)2016_0008。将大鼠随机分为四组：假手术组、模型组、曲美他嗪低剂量组(低剂量组)和曲美他嗪高剂量组(高剂量组)，每组12只。

    1.2 实验方法：

    1.2.1 缺血再灌注损伤模型制备：腹腔注射10%水合氯醛3ml/kg麻醉，麻醉成功后固定大鼠四肢、头部。将针型电极插入四肢皮下，记录心电图。气管插管后连接呼吸机正压通气。沿胸骨左缘第3、4肋间开胸，逐层切开皮肤、皮下组织、肌肉，剪开心包，暴露心脏。假手术组大鼠在冠状动脉左前降支只穿线、不结扎；对模型组、低剂量组和高剂量组大鼠制备急性心肌缺血再灌注损伤模型，结扎冠状动脉左前降支，在肺动脉圆锥和左心耳连线中点下方约2mm处将缝合针穿过冠状动脉左前降支深部，在肺动脉圆锥旁出针，将一根直径1.5mm的凹槽硅胶管置于结扎线与血管之间，拉紧结扎线，使硅胶管压迫冠状动脉左前降支而致闭塞。保持缺血状态30min后松开，再灌注2h。在缺血30min时低剂量组给予10mg/kg曲美他嗪灌胃，高剂量组给予20mg/kg曲美他嗪灌胃。假手术组和模型组均给予等体积生理盐水灌胃。以心电图ST段抬高≥0.3mV和(或)T波高耸、局部心肌出现紫绀作为心肌缺血标志；心电图ST段降低和(或)T波恢复、心肌缺血区转红为再灌注成功标志。

    1.2.2 免疫组化检测：取心尖部心肌组织采用生理盐水冲洗，4%多聚甲醛固定24h，石蜡包埋，制成5μm切片。经二甲苯、100%乙醇、75%乙醇梯度脱水后用蒸馏水洗 ......