高学忠，黄隐青，林 丛，黄亦炜，张 鑫，吴连拼

    长期大量饮酒，摄入体内的酒精及其代谢产生毒性更为巨大的乙醛等对心脏产生毒害作用，使心肌代谢和组织学异常，导致心肌变形、心脏扩大、心肌收缩力降低，心功能下降，临床上称之为酒精性心肌病(alcohol cardiomyopathy，ACM)[1]。随着现代饮酒人数的逐渐增多，饮酒量的加大，ACM的发病率也逐年上涨[2]。酒精对心脏的损害已成为威胁人类健康的世界性问题，越来越受到关注，但ACM的发病机制目前尚不十分清楚。

    自噬(autophagy)是将机体内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体内进行消化降解的动态过程，是维持机体内环境稳态的重要调节机制[3]。正常水平的自噬对心脏的结构和功能发挥着至关重要的作用。但自噬过度和自噬不足却可能导致疾病的发生。此外，大量文献表明自噬在多种心血管疾病中都扮演着重要的作用，如心肌缺血、再灌注、心肌肥大、糖尿病心肌病等均可诱导心肌内自噬水平增强[4，5]。因此自噬在不同的病理条件下，扮演着不同的角色，需要进一步的研究确认。而在慢性酒精心肌病的发生和发展过程中，自噬的研究却很少涉及。本研究通过建立小鼠酒精心肌病模型，观察心肌自噬的变化，旨在探讨自噬对酒精心肌病的作用以及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)介导的自噬的发生机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料、试剂与仪器：40只雄性C57BL/6小鼠，12周龄(温州医科大学实验动物中心)；酒精饲料(南通特洛菲饲料科技有限公司)；TUNEL试剂盒购自Roche公司。3_Methyladenine和SF1670试剂购自Sigma_Aldrich公司；PTEN抗体、LC3A/B抗体、p_mTOR抗体、mTOR抗体、β_actin抗体购自Abcam公司；AKT抗体、p_AKT抗体、p_s6抗体、s6抗体、cleaved Caspase_3抗体购自CST公司；荧光二抗驴抗兔IgG购自Invitrogen公司；激光共聚焦显微镜(日本Niko公司)；Vevo7701型超声心动仪(加拿大公司)。

    1.2 方法：

    1.2.1 小鼠分组：40只雄性C57BL/6小鼠，随机分为四组，分别为对照组(Con)、慢性酒精心肌病组(EtOH)、慢性酒精心肌病+3_MA组及慢性酒精心肌病+PTEN抑制剂(SF1670)组 ......