严重烫伤合并铜绿假单胞菌脓毒症影响家兔外周血中性粒细胞的蛋白质组学研究

http://www.100md.com 2008年2月1日 曾纪章　张丕红　李莉莉　任利成　梁鹏飞　黄晓元

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     [摘要]目的 研究严重烫伤合并铜绿假单胞菌脓毒症家兔外周血中性粒细胞蛋白质组变化。方法 实验地点在卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室(湘雅医院内)，实验动物为健康雄性成年中国本兔24只，随机分为四组(每组6只)：对照组(A组)、严重烫伤组(B组)、严重烫伤并脓毒症2h组(C组)和严重烫伤并脓毒症6h组(D组)。A组37℃温水假烫，B组烫伤(30%TBSA，Ⅲ度)后24h采颈动脉血分离中性粒细胞，C、D组烫伤(30%TBSA，Ⅲ度)后24h经耳缘静脉注射对数生长期铜绿假单胞菌悬液(ATCC 27853，浓度6×10°cfu/ml，剂量1ml/kg)，再分别于2、6h后采颈动脉血分离中性粒细胞。裂解细胞，提取总蛋白。利用双向凝胶电泳分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，扫描图像，PDQuest软件分析图像并筛选组间差异蛋白质点(判断差异的标准为平均表达量相差超过3倍，由本课题组成员设定)。再从凝胶上切割差异蛋白质点，胰酶消化，应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱分析，得到肽质量指纹图，利用Mascot软件搜索数据库、鉴定蛋白质。结果 A、B、c、D组平均蛋白质点数分别为(759±20)、(749±27)、(786±29)、(774±26)个，平均匹配率分别为93%、91%、89%、92%。C、D两组间蛋白质点表达量差异无统计学意义，B、c、D组与A组比较，筛选出21个差异蛋白质点，鉴定了其中9个，包括7种蛋白质。结论 家兔严重烫伤并铜绿假单胞菌脓毒症时外周血中性粒细胞蛋白质组发生变化，表达改变的有蛋白质二硫键异构酶、β-肌动蛋白、膜联蛋白Ⅰ、巯基特异性抗氧化蛋白等，功能涉及细胞内酶活性、细胞能动功能及变形性、炎症、代谢、抗氧化能力、细胞凋亡等，这些蛋白质与烧伤后铜绿假单胞菌脓毒症有关。

    [关键词]兔；烧伤；脓毒症；铜绿假单胞菌；中性粒细胞；蛋白质组

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