高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Notch受体的影响
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[摘要]目的 检测Notch 1在肺泡Ⅱ型上皮细胞(ACEⅡ)与肺成纤维细胞共培养的高氧损伤模型中表达的变化，初步探讨Notch信号在高氧肺损伤中的作用，为临床防治新生儿急、慢性肺损伤提供理论的依据。方法SpragneDawkey雌鼠12只，体质量200～220 g，雄鼠3只，220～250 g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。将共培养的AECⅡ随机分为高氧组和对照组。高氧组按3L/min通入950 ml/L O2和250 ml/L CO2，10 min后，立即用封口胶密封培养板，置于37℃、50 ml/L CO2培养箱。于给氧后24、48、72、96 h，收获各组细胞，测氧仪检测培养瓶中的O2体积分数，将低于900ml/L O2的标本弃去。免疫组织化学法鉴定细胞，台盼蓝拒染实验计算细胞纯度，确认共培养造模成功。每24 h更换培养基并给氧。每一时间点同时设对照组，置于37℃、50 ml/L CO2培养箱中培养。MTT法检测AECⅡ增殖活力，绘制生长曲线；免疫组织化学法定位Notchl蛋白；荧光定量PCR检测notchl mRNA；流式细胞术双标记法检测AECⅡ、AEC Ⅰ细胞百分率。结果 免疫组织化学法显示高氧组Notchl活化入核受抑；高氧组各时间点Notch1 mRNA分别下降为对照组的0.43、0.29、0.11、0.03倍(置信限95%)，通氧后AECⅡ百分率显著降低[24 h高氧组vs.对照组：(68.92±6.88)%vs.(90.35±4.01)%，P=0.006；48 h高氧组vs.对照组：(38.03±3.27)%vs.(61.47±4.81)%，P=0.000；72 h高氧组vs.对照组：(20.13±4.45)%vs.(52.05±3.35)%，P=0.000；96 h高氧组vs.对照组：(8.17±1.99)%vs.(52.59±2.93)%，P=0.000]。AECI百分率除96 h外均增高[24 h高氧组vs.对照组：(0.11±0.03)%vs.(0.01±0.01)%，P=0.006；48 h高氧组vs.对照组：(49.73±3.45)%vs.(16.13±2.13)%，P=0.000；72 h高氧组vs.对照组：(52.43±3.14)%vs.(5.98±0.95)%，P=0.000；96 h高氧组vs.对照组：(19.85±3.26)%vs.(29.03±3.16)%，P=0.007]。结论 高氧可抑制AECⅡNotchl受体的活化，引起AECⅡ增殖减弱，转分化异常。研究如何调控Notch信号通路将为修复肺泡上皮，恢复其正常生理功能打开新思路。
[关键词]高氧；肺泡Ⅱ型上皮细胞；共培养；Notch
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