hBDNF-GFP基因转染神经干细胞对视神经损伤大鼠视网膜BDNF表达的影响
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[摘要]目的探讨移植hBDNF-GFP基因转染神经干细胞后对视神经损伤大鼠视网膜BDNF表达的影响。方法①78只sD大鼠随机分为正常对照组(n=6)、视神经夹伤组(n=72)。视神经夹伤组动物行右侧视神经夹伤后随机平均分为三个亚组：分别于玻璃体腔内注射0.01mol/L PBS(PBS组)，GFP基因转染神经干细胞(GFP-NSCs组)和hBDNF-GFP基因转染神经干细胞(hBDNF-GFP-NSCs组)。各组动物单纯暴露左侧视神经作为假损伤组。分别于移植后3d，7d，14d和28d处死动物取视网膜，ELISA法检测各组视网膜中BDNF含量。②另取6只视神经损伤大鼠移植hBDNF-GFP-NSCs，分别于2周、4周和8周各处死2只大鼠，取眼球做冰冻切片观察移植细胞存活、迁移情况。③35只SD大鼠随机分为4组：正常对照组(n=5)、右眼视神经损伤NSCs治疗组(n＝10)、GFP-NSCs治疗组(n＝10)及hBDNF-GFP-NSCs治疗组(n=10)。④各组于术后4周和8周分别处死5只大鼠，West-ern-blot法检测视网膜组织中BDNF表达。结果①ELISA结果显示，正常对照组BDNF含量与假损伤组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，移植手术后第3天时，三个损伤亚组视网膜匀浆上清中hBDNF含量明显增加(与假损伤组比较P<0.05)，而三组间差异无统计学意义(P>0.05)；7d时，GFP-NSCs组与假损伤组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，而PBS组、hBDNF-GFP-NSCs组与假损伤组比较差异无统计学意义(P>0.05)，PBS组与GFP-NSCs组间及hBDNF-GFP-NSCs组与GFP-NSCs组间差异具有统计学意义(P<0.05)；移植第14天和28天时，PBS组和GFP-NSCs组中视网膜BDNF含量降低，而hBDNF-GFP-NSCs组中BDNF含量与其他三组比较明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。②冰冻切片示移植后，hBDNF-GFP-NSCs可在宿主视网膜内存活，并逐渐迁移至视网膜各层。③Western-blot检测显示，各组内第4周和第8周BDNF表达差异无统计学意义，移植hBDNF-GFP-NSCs组视网膜组织中BDNF表达明显高于于其他各组。结论hBDNF-GFP基因转染神经干细胞移植后可在宿主视网膜长期存活，且可以稳定高表达BDNF。
[关键词]脑源性神经营养因子；干细胞；转染；视网膜
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