1.2 脾组织标本的采集

    于术后24 h在氯胺酮腹腔麻醉下迅速剖腹、取脾，立即置入液氮中，-70 ℃保存。

    1.3 基因芯片杂交及检测

    基因芯片杂交和检测的方法参照文献[3-4]。

    1.4 差异表达基因的比较

    观察脓毒症组与对照组基因表达差异。

    1.5 RT-PCR验证

    根据差异表达基因，随机选取Procr、Cxcr4两个基因作RT-PCR来验证数据的可靠性。

    1.5.1 引物设计 利用 primer premier 3 v 0.4.0 引物设计软件设计Procr和Cxcr4的引物。并且通过NCBI中Blast功能，初步检测引物的特异性。引物由上海博星基因芯片有限责任公司合成。Cxcr4上游引物：5’CCTTATCCTGGCTTTCTTTGC 3’，Cxcr4下游引物：5’ CTCCGT GATGGAGATCCACTT 3’；Procr上游引物：5’ GAAAGGGCTGGACTGGTGG 3’，Procr下游引物：5’ CATTCTTCGTAGGCAGATGCTG 3’。

    1.5.2 操作过程 把提取的总RNA逆转录成cDNA，稀释5倍， 使其质量浓度为50 ng/μl。于384孔反应板中加入如下试剂(反应体系为10 μl)：Mix(2×)：5 μl，Amplification primer 1 (2 μmol/L)：1 μl ......