Western blot 分析：再灌注6 h后取出心脏-80 ℃冷冻，而后提取心肌组织总蛋白，取上述蛋白提取液上清(含蛋白200 μg)进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) ，将电泳分离后的蛋白质电转移至硝酸纤维素膜上，经封闭、洗脱后分别加入磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、磷酸化应激活化蛋白激酶(stress activated protein kinase，P-JNK)、磷酸化p38 MAPK(P-p38)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(caspase-8)多克隆抗体(均为1∶200)，室温孵育6 h ，洗膜后以相应的二抗室温孵育1 h，并以兔抗小鼠β-actin(1∶200)单克隆抗体同样操作作为对照。抗原抗体复合物用ECL法显示，暗室X光胶片曝光，采用Image-Pro Plus 图像分析软件(Version 4.1 ......