1.5 Western blot 分析

    PCI术后第35天，断颈处死大鼠、剥取梗死灶同侧新鲜海马液氮冻存。收齐标本后，加入添加了10%蛋白酶抑制剂和1%磷酸酶抑制剂的缓冲液(10 mmol/L Tris pH7.4， 150 mmol/L NaCl， 1 mmol/L EDTA， 1 mmol/L EGTA)，冰浴下匀浆，26 000×g在4 ℃离心30 min。取上清，用Bio-Rad DC 蛋白质定量测定试剂盒(Bio-Rad Laboratories， CA， USA)在分光光度计上进行蛋白质定量测定。SDS PAGE采用4%积层胶，12%分离胶，上样量为40 μg，电压12 V/cm，结束后取出凝胶电转移至同等大小的硝酸纤维素膜上，封闭1 h。加入单克隆抗体mouse anti-Notch1(1∶250， Chemicon)、rabbit anti-Neuro D(1∶100， Santa Cruz)、mouse anti-Mash1(1∶250， PharMingen)，4 ℃过夜。TBST漂洗；联有辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase ......