杜亚豪，郑月宏，田 翠，李汇华

    腹主动脉瘤血管平滑肌细胞凋亡和自噬研究

    杜亚豪，郑月宏，田 翠，李汇华

    目的 探讨血管平滑肌细胞(SMC)凋亡和自噬与腹主动脉瘤(AAA)发病的关系。方法 采用原位末端DNA标记(TUNEL)技术观察AAA和人正常主动脉组织中SMC凋亡的情况，并用免疫组织化学分析其中LC3的蛋白表达。提取AAA和正常主动脉组织RNA，采用RT-PCR方法检测其中与自噬相关的基因Beclin1、Atg4b、Bnip3、Vps34的表达。结果 AAA组织中凋亡的SMC明显高于正常主动脉组织(P<0.05)；LC3蛋白在AAA中的表达高于正常主动脉组织(P<0.05)；AAA中Beclin1、Atg4b、Bnip3、Vps34表达水平明显高于正常主动脉组织(P<0.05)。结论 SMC凋亡和自噬在AAA的发病中起重要作用。

    主动脉瘤，腹；细胞凋亡；自噬；肌，平滑，血管

    腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm，AAA)是一种以腹主动脉局限性扩张为主的血管疾病，多见于65岁以上老年人，病死率较高。AAA的发病机制尚未明确，普遍的观点认为是遗传、环境、血流动力学和免疫等多种因素共同作用的结果。目前认为其发病的主要机制是主动脉细胞外基质的降解和中膜平滑肌细胞(smooth muscle cell，SMC)的减少。SMC是腹主动脉中膜的主要细胞，直接或间接地分泌弹力蛋白、胶原蛋白及其他基质蛋白，对于动脉弹力板层的构筑和修复起着十分重要的作用。细胞凋亡和自噬都是主动而有序的细胞自我消亡，SMC的凋亡和自噬与心血管系统生理病理重构密切相关。本研究通过检测AAA与人正常主动脉组织SMC的凋亡情况，以及在mRNA和蛋白水平上检测其中的细胞自噬情况，探讨SMC的凋亡和自噬在AAA发病中的机制。

    1 材料与方法

    1.1 组织和试剂 10例AAA组织由北京协和医院血管外科医师术中获取后提供，6例人正常主动脉组织取自健康非正常死亡尸体(死亡时间<10 min)。在无菌、无RNA酶条件下，于平肾动脉下方约4 cm处切取主动脉壁，迅速冻存在液氮中备用。Trizol购自美国Invitrogen公司，LC3抗体购自美国R&D公司。免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物公司，T UNEL试剂盒购自瑞士Roche公司，RT-PCR试剂盒购自Qiangen公司。其余均为国产分析纯试剂。

    1.2 组织凋亡染色 AAA和正常主动脉组织固定、包埋，制作石蜡切片 ，厚度4 μ m ......