曾静波,李玉秀,孙 琦,王 姮

    三磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路为胰岛素主要信号传导通路,发生胰岛素抵抗时,PI3K-Akt通路的活性降低[1,2]。PTEN(phosphatase and tension homologue deleted on chromosome 10,染色体10删除的强力同系物的物磷酸酶)为一种脂质磷酸酶,是一个很有效的PI3K-Akt通路的负性调节因子[3-5]。我们已有的研究结果表明胰岛素抵抗糖尿病 KKAy小鼠肝及横纹肌组织PTEN蛋白的表达增加[6]。Lo等[7]研究了肥胖Zucker大鼠比目鱼肌PTEN的表达,发现胰岛素抵抗时PTEN的表达明显增加,但其机制不详。罗格列酮及二甲双胍均可改善胰岛素敏感性[8,9]。罗格列酮可以快速上调细胞中PT EN mRNA水平和蛋白水平的表达[10]。目前尚无罗格列酮及二甲双胍在组织水平对PTEN表达影响的报道。本研究通过观察胰岛素抵抗KKAy糖尿病小鼠罗格列酮和二甲双胍治疗后PI3K-Akt通路活性及 PTEN表达的变化,探讨降糖治疗以及改善胰岛素敏感性对肝及横纹肌组织PTEN表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物分组及标本采集 实验动物均为雄性小鼠,购自中国医学科学院实验动物所,饲养在室温22～25℃、湿度约50%的动物房中,每昼夜给予12 h光照和12 h黑暗。分为对照C57BL/6 J小鼠组和KKAy小鼠组,C57BL/6 J小鼠普通饲料喂养至16～18周龄,处死取材;KKAy小鼠普通饲料喂养至12周龄,随后高脂饲料(1.5%胆固醇和5%动物油)喂养4周,测定尾静脉血糖(罗氏爱康全血糖仪),连续两次随机血糖大于16.7 mmol/L诊断为糖尿病。KKAy糖尿病小鼠随机分为3组,一组不经任何处理,一组给予罗格列酮(4 mg/片,葛兰素史克公司赠送)12.5 mg/kg bid灌胃,一组给予二甲双胍(粉剂,施贵宝公司赠送)3 g/kg bid灌胃,治疗4周。实验动物均在处死前空腹12 h,每组动物分别随机分为未用胰岛素处理组及胰岛素处理组,未用胰岛素处理组小鼠尾静脉血测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),眼内疵静脉取血,留眦取血清ELISA法测定血胰岛素后处死;胰岛素处理组胰岛素处理前后尾静脉取血测血糖,腹腔注射胰岛素(5 mU/g)后10 min处死小鼠。各组小鼠在处死后即取肝组织、股四头肌。

    1.2 试剂 小鼠胰岛素检测ELISA试剂盒购自Linco公司,PT EN单克隆抗体及 Phospho-Akt(Ser473)多克隆抗体均购自Cell Signaling公司 ......