陈艳明,陈 琪,王士雯

    脓毒症是严重创伤、感染及大手术等多种应激状态时的常见并发症,其发病率和死亡率居高不下,而心功能不全在脓毒症早期就可出现,并且与预后密切相关。脓毒症时心功能的降低是多种因素累加的结果,包括氧化磷酸化脱偶联,细胞产生高能磷酸盐的能力降低;心肌冬眠;循环抑制因子TNF-α激活心脏中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS),产生大量 NO[1]。但脓毒症时各型NOS表达及可能作用尚不明确。本研究拟对此进行初步探讨。

    1 材料与方法

    1.1 材料 成年雄性Wistar大鼠(250～350 g),由解放军总医院实验动物中心提供。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)购自美国Sigma公司。总RNA提取试剂盒、cDNA第一链合成试剂盒、PCR试剂盒购自北京Tianwei公司。兔抗大鼠内皮型NOS(eNOS)、兔抗大鼠神经元型NOS(nNOS)、兔抗大鼠诱导型NOS(iNOS)均购自武汉 Boster公司。

    1.2 脓毒症模型建立 30只大鼠,分别腹腔注射生理盐水和LPS(10 mg/kg)各0.2 ml,形成对照组和LPS组。给药6h后取组织备用。

    1.3 血流动力学测定 脓毒症模型的建立同前。Wistar大鼠以乌拉坦(1 g/kg)经腹腔注射麻醉,仰卧位固定于手术台上。分离右侧颈总动脉,用充盈0.4%肝素盐水的PE50管向心性插入动脉,连接多道生理记录仪检测心电和血压变化。稳定30 min后向前推进导管至左心室并固定导管,稳定10 min后记录左心室内血流动力学参数,包括心率(heart rate,HR)、等容收缩期左室内压力最大上升速率(+dp/dtmax)、等容舒张期左室内压力最大下降速率(-dp/dtmax)等的改变。

    1.4 NOS活性测定 按照南京生物建成技术公司生产的试剂盒说明书测定的结构型NOS(constitutive NOS,cNOS)及诱导型(inducible NOS,iNOS)。

    1.5 各型NOS的表达

    1.5.1 半定量RT-PCR T rizol试剂提取RNA 紫外分光光度计进行RNA定量 ......