车宇芳, 叶 飞, 张 泳, 姜 泊，吴本俨

    (1解放军总医院南楼临床部消化内科, 北京 100853; 2美国西奈山医学院, 纽约 10029; 3南方医科大学附属南方医院消化内科, 广州 510515)

    肝癌是成人最常见的一种肝脏恶性疾病，是目前世界上第五常见的实体肿瘤疾病, 并且高居癌症死亡的第三位[1]。尽管临床上有众多的肝癌治疗方法, 包括肝脏移植、外科切除、局部治疗, 但是仍有>70%肝癌患者的预后不是很理想[2]。几乎85%肝癌患者在确诊时已经不能进行根治性治疗, 而只能给予保守治疗, 比如肝动脉插管化疗、射频治疗、化疗等[3]。耐受性好、效率高的治疗方法将是未来肝癌治疗发展的新方向[4]。

    在肿瘤细胞中, 细胞周期素依赖激酶(cyclin dependent kinase, CDK)功能的失调控是一种常见的现象。鉴于这种原因, 影响CDK表达的化合物flavopiridol和其他一些新兴化学合成物得到了很好的发展[5]。Flavopiridol是来源于Amoora rohituka和Dysoxylumbinectariferum根茎的一种半合成黄酮类物质[6], 它可以有效抑制人癌细胞株中CDK1、CDK2、CDK4、CDK7的表达, 并且引起一系列细胞毒性, 导致细胞周期G1-S和G2-M期阻滞[7,8]。最近, flavopiridol对慢性淋巴细胞白血病治疗已经进入了Ⅱ期临床试验[9,10],但是关于其在肝癌治疗方面的报道却很少。本次研究目的在于了解flavopiridol是否可以影响肝癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期, 从而为其将来应用于肝癌治疗奠定生物学基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要实验材料和试剂

    细胞培养试剂DMEM细胞培养基、胎牛血清、青霉素/链霉素双抗均购自Invitrogen公司; flavopiridol购自Sigma-Aldrich公司; CDK4抗体, CDK6抗体,cyclinD1抗体, α-tubulin抗体购自Santa Cruz公司; 羊抗兔和羊抗鼠HRP抗体购自Bio-Rad公司; BCA蛋白检测试剂盒购自Pierce公司; 细胞计数试剂盒购自碧云天生物公司; 细胞周期试剂盒购自凯基生物公司; TACSTMAnnexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自R&D公司; 蛋白提取液购自Sigma公司;Super SignalRWest Pico Trial化学发光检测试剂盒购于Pierce公司, 细胞培养孔板均购自Corning公司;其余化学试剂均为国产分析纯和生物化学试剂 ......