杨士芳, 高兴林, 吴 健

    香烟烟雾提取物致大鼠膈肌细胞氧化损伤

    杨士芳, 高兴林*, 吴 健

    (广东省人民医院, 广东省医学科学院, 呼吸内科, 广东省老年医学研究所, 广州 510080)

    研究经香烟烟雾提取物(CSE)刺激后大鼠膈肌细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的变化以及细胞内活性氧(ROS)水平和8-羟基鸟嘌呤DNA 糖苷酶1(OGG1)表达对8-OHdG含量变化的影响。用不同浓度CSE分别刺激大鼠膈肌细胞24、48和72h后，采用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)检测大鼠膈肌细胞8-OHdG的含量，流式细胞术检测大鼠膈肌细胞ROS 水平，采用实时定量PCR检测OGG1 mRNA水平，用Western印迹法检测OGG1蛋白水平。经相同CSE浓度分别刺激大鼠膈肌细胞24、48和72h后,大鼠膈肌细胞中8-OHdG含量、ROS水平及OGG1 mRNA和蛋白水平均无明显差异。但经不同浓度CSE刺激相同时间后，10.00% CSE和20.00% CSE刺激组大鼠膈肌细胞8-OHdG含量明显高于对照组和5.00% CSE刺激组(<0.05)；大鼠膈肌细胞内ROS水平、OGG1 mRNA和蛋白水平较对照组均明显升高(<0.05)；大鼠膈肌细胞 8-OHdG含量与其ROS水平呈明显正相关(＝0.826，＝0.000)；经CSE刺激后，大鼠膈肌细胞OGG1 mRNA和蛋白水平均高于对照组(<0.05)，但大鼠膈肌细胞8-OHdG含量与其OGG1 mRNA和蛋白水平无明显相关(＝0.373，＝0.254；＝0.329，＝0.296)。CSE刺激可引起大鼠膈肌细胞8-OHdG升高，8-OHdG含量与ROS水平有关，但与其修复酶OGG1表达水平无明显相关。

    肺疾病, 慢性阻塞性; 膈肌细胞; 8-羟基脱氧鸟苷; 8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1

    膈肌是最主要的呼吸肌，膈肌疲劳被认为是导致呼吸衰竭的重要病理生理机制之一。由膈肌疲劳导致的呼吸衰竭是慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases，COPD)晚期患者死亡的最重要原因，因而延缓COPD患者的膈肌疲劳进而减少因呼吸衰竭造成的死亡在临床上显得尤为重要。已有研究发现氧化应激在COPD的膈肌疲劳中具有重要意义[1,2]，但其具体机制尚未阐明。吸烟是COPD重要发病因素，香烟烟雾中的大量活性氧(reactive oxygen species，ROS)可以直接攻击DNA，使DNA上的鸟嘌呤(guanine ......