申红远，白 静，汤 喆，梁 伟，马清华，刘秀华，王 禹*

    (解放军总医院：1老年心血管病研究所，4病理生理研究室，北京 100853；2解放军第324医院心血管内科，重庆 400020；3临沂市沂水中心医院心血管内科，临沂 276400)

    血管钙化在糖尿病和尿毒症患者中十分常见，与心肌梗死、血管顺应性下降、血管成形术时夹层形成有关，血管钙化也被认为是心血管疾病的重要危险因素之一[1,2]。钙化的血管对血管舒张剂抵抗，比正常血管更加僵硬，更容易导致血栓形成和动脉粥样硬化斑块破裂。最近的研究表明，血管钙化不是一个被动的、血管疾病终末期、退行性变的表现，是一个主动的受到精确调控的过程，和骨生成极为相似[3]。血管钙化是在多种刺激因素下血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)向成骨样细胞表型转化(transformation)的过程[4]。VSMCs向成骨样细胞转分化(transdifferentiation)后碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性增加，基质小泡形成，表达骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins，BMPs)，例如BMP2，以及骨基质蛋白，如骨钙素(osteocalcin bone Gla protein，BGP)、骨连蛋白(osteonectin)、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein)[1]。高糖刺激可以引起VSMCs向成骨样细胞转分化，引起成骨样细胞标志性分子核心转染因子(Cbfα-1)和BGP表达升高，ALP活性增加[5]。高糖和葡萄糖代谢产物葡萄糖胺可以引起血管平滑肌细胞内质网应激，与动脉粥样硬化形成有关[6]。内质网应激可以引起未折叠蛋白反应(unfolded protein response，UPR)，UPR包括IRE1α、XBP1和蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK)途径[7]。VSMCs向成骨样细胞表型转化的机制还未完全阐明，本实验旨在揭示内质网应激PERK途径是否在高糖诱导VSMCs向成骨样细胞转分化过程中发挥作用。

    1 材料与方法

    1.1 试剂

    低糖DMEM培养液(Gibco)，优质胎牛血清(PPA)，D-Hanks液(北京索莱宝科技有限公司)，胰蛋白酶、D-葡萄糖、D-甘露醇(Amresco公司)，抗Cbfα-1抗体、抗p-PERK抗体、抗GRP78、抗BGP抗体购自(Santa Cruz公司) ......