李素芳，陈 红，任景怡，李晶津，宋俊贤，耿 强

    不稳定冠心病循环microRNA表达谱特点及功能分析

    李素芳，陈 红*，任景怡，李晶津，宋俊贤，耿 强

    (北京大学人民医院心脏中心，北京 100044)

    明确不稳定冠心病患者循环microRNA(miRNA)表达谱，并对差异表达miRNA在细胞增殖中的调控作用进行探讨。(1)分别收集不稳定冠心病患者(试验组)及疑似心绞痛的非冠心病患者(对照组)血浆，通过miRNA芯片检测，得到试验组患者循环miRNA表达谱。(2)分别在3个不同的生物信息学数据库——TargetScan、miRanda和DIANAmT，对miRNA靶基因进行预测，得到在3个数据库均有预测的miRNA靶基因。(3)通过DAVID数据库，对上述靶基因在细胞增殖方面的功能进行聚类及信号通路分析。(4)通过实时(real time，RT)-PCR实验，进一步验证循环miRNA-19b(miR-19b)在两组中的表达水平。(5)结合功能聚类分析结果，对差异表达最明显的(miR-19b)在细胞增殖中的调控作用进行验证。(1)与对照组相比，试验组存在39个差异表达miRNAs，其中miR-19b差异表达最明显。(2)通过对miRNA靶基因的预测，发现有14个miRNAs与细胞增殖关系密切，其中miR-19b调控的细胞增殖相关基因最多。(3)RT-PCR检测证实不稳定冠心病患者血浆miR-19b水平较对照组明显增高。(4)细胞增殖实验表明，miR-19b明显抑制血管内皮细胞(EA.hy926细胞)增殖。不稳定冠心病患者具有特定的循环miRNA表达谱，这些miRNAs可能是不稳定冠心病的潜在生物标志物。miR-19b可能通过抑制内皮细胞增殖，发挥稳定动脉粥样硬化斑块的保护作用。

    冠心病；微小RNAs；细胞增殖

    微小RNAs(microRNAs，miRNAs)是一类在进化上高度保守的单链、非编码小分子RNA[～22nt]，在转录后水平负性调控靶基因的表达。目前在人体中已发现1000多个miRNAs，约30%的人类蛋白编码基因受到miRNAs的调控[1,2]。miRNA参与调节体内许多生理和病理过程，与心血管疾病、糖尿病、肿瘤等多种疾病的发病或预后密切相关。早在2008年有关肿瘤的研究中发现，miRNAs广泛存在于血液循环中[3]。而且在不同的疾病状态或病理刺激下，循环miRNAs表达谱存在差异，因而可能成为一类新的诊断疾病的生物标志物。急性冠脉综合征主要包括不稳定冠心病(unstable coronary heart disease ......