沈明志，李冬云，范 利，付振虹，韩宝石，李 可，胡 鑫，刘海斌，薛 桥*

    银杏叶提取物通过Wnt减轻内质网应激诱导的心肌细胞损伤

    沈明志1,2，李冬云1，范 利2，付振虹1，韩宝石1，李 可1，胡 鑫1，刘海斌3，薛 桥1*

    (1解放军总医院海南分院心内科，三亚 572013；2解放军总医院老年心内科，北京 100853；392474部队医院内科，三亚 572018)

    探讨银杏叶提取物(EGB)对内质网应激诱导心肌细胞损伤的影响以及Wnt通路在其中的作用。取1d龄乳鼠心肌细胞培养后，应用衣霉素(Tm)构建心肌细胞损伤模型，随机分为对照组、Tm组、Tm+EGB组、EGB组。噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞存活率，双荧光报告系统检测Wnt活性，实时定量PCR检测C-myc、CyclinD1基因水平。Tm降低了心肌细胞存活率，EGB处理改善了心肌细胞存活率；与对照组比较，Tm组Wnt活性显著降低，与Tm组比较，Tm+EGB组Wnt活性、C-myc、CyclinD1水平明显升高，而应用Wnt抑制剂分泌型卷曲相关蛋白(sFRP)，Wnt活性显著下调，C-myc、CyclinD1水平下调，EGB的保护作用显著下降。EGB可以抑制Tm诱导的大鼠心肌细胞损伤，其机制可能与改善Wnt信号有关。

    银杏叶提取物；衣霉素；内质网应激；心肌细胞；Wnt

    内质网参与了膜蛋白与分泌蛋白的折叠过程，在细胞维持功能与存活过程中扮演了重要角色[1,2]。糖剥夺、病毒感染、错误折叠或未折叠蛋白的增加将会干扰内质网的功能，从而诱发内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)[3,4]。ERS是机体对外界或自身反应的一种自我保护机制，以维持内质网的稳态，促进细胞生存，但过强或持续时间过长的ERS可以诱导细胞凋亡[5,6]。

    研究表明，Wnt信号通路在抗凋亡过程中扮演了重要角色[7?9]。然而，Wnt信号在ERS过程中扮演的作用迄今尚无报道。

    银杏叶又名白果叶，是从银杏科植物银杏的干燥叶提取的有效成分，主要化学成分包括银杏内酯及黄酮苷，具有保护心血管、改善微循环的功效[10,11]，但机制尚不完全清楚。

    本实验拟应用衣霉素(tunicamycin，Tm)诱导大鼠心肌细胞损伤模型[12]，观察银杏叶提取物(extracts ofleaf，EGB)对衣霉素诱导心肌细胞损伤的影响，以及对Wnt信号通路表达水平的影响及意义，为EGB防治ERS相关性疾病提供理论依据。

    1 材料与方法 ......