魏美林,王倩倩,李 旭,韩峻峰,魏 丽

    (上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科,上海市糖尿病临床医学中心,上海市糖尿病重点实验室,上海市糖尿病研究所,上海 200233)

    胰岛素瘤是最常见的胰腺内分泌肿瘤,占后者总数的70%～80%,发病率约为4/100万;其中女性约占60%。绝大多数胰岛素瘤为良性,恶性比例约占10%[1?3];通常表现为单个散在的肿瘤,直径常<2cm[4,5],病理表现为胰岛β细胞形成的腺瘤或者癌。由于胰岛素不适当的分泌,临床上常导致患者反复发作低血糖,对患者的危害极大。手术切除肿瘤是唯一的根治性治疗方法[6]。目前胰岛素瘤的发病机制尚不清楚,进一步深入研究胰岛素瘤发生、发展的分子机制具有重要的意义。

    GATA6是锌指转录因子家族中的一员,位于18q11.1→q11.2,全长33.1kb,可识别并结合多个基因的启动子区的A/TGATAA/G序列从而发挥调控的作用[7]。GATA6参与体内多种细胞组织的分化过程,对心脏、胃肠道及胰腺等组织的发育具有关键的作用[8,9]。除参与细胞的分化,GATA6与细胞的增殖和凋亡也密切相关。近来有研究表明,GATA6的异常表达参与体内多种肿瘤的发生和发展[10,11]。然而迄今为止,GATA6与胰岛素瘤的关系未见研究报道,因此我们设计了本试验,旨在探讨GATA6在胰岛素瘤发病机制中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 胰岛素瘤及正常胰腺组织标本的来源与制备

    收集2009年1月至2014年9月在上海交通大学附属第六人民医院行胰岛素瘤手术切除的3例患者的手术标本及其临床资料,其中男性1例、女性2例,年龄分别为32岁、51岁及56岁。手术标本经病理证实为胰岛素瘤,取肿瘤中间组织为瘤体组织,术中游离的肿瘤边界组织为瘤旁组织,采用液氮保存。蛋白印迹法(Western blotting)试验中,3例胰岛素瘤瘤体组织作为试验组,自身瘤旁组织作为对照组。另外,在免疫荧光试验中,为了与正常胰腺组织内的胰岛β细胞的结构及GATA6的表达定位对比,收集2例正常胰腺组织,标本取自因其他原因行胰腺部分切除的非肿瘤患者,且经术后病理证实。免疫荧光试验中将3例胰岛素瘤标本及2例正常胰腺组织标本置于10%甲醛(福尔马林)溶液固定,石蜡包埋,4μm连续切片。标本的收集及使用均通过上海交通大学附属第六人民医院伦理委员会批准且经患者同意使用。

    1.2 主要试剂

    小鼠胰岛素瘤细胞系MIN6细胞(上海市糖尿病研究所);针对小鼠GATA6基因干扰的小干扰RNA(siRNA),(Life technologies公司,美国),GATA6 siRNA正义链:5'-CAAAAAUACUUCUCCUUCUtt-3',反义链:5'-AGAAGGAGAAGUAUUUUUGgt-3';阴性siRNA(negative siRNA;Life technologies公司,美国),与已知的小鼠基因没有同源性 ......