鲁 一,韩丽娟,慕竹青,周林静,孟娜娜,马晓艳,齐路霞,项红霞,何秋立,张桂芳

    (新乡市中心医院肿瘤内科,新乡 453000)

    非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)是恶性淋巴瘤中较常见的一大类型,主要发生于淋巴结,也可发生于结外淋巴组织和非淋巴组织,其肿瘤行为从惰性到侵袭性不等。预后较差的高度恶性淋巴瘤在我国发病率较高,约占NHL的30%[1]。NHL是一种异质性较强的疾病,根据不同的淋巴细胞起源,可分为B细胞淋巴瘤(B-NHL)、T细胞淋巴瘤(T-NHL)和NK/T细胞淋巴瘤(NKTL)。除少数类型外,T-NHL及NKTL较B-NHL侵袭性强、预后差。NHL患者往往存在着免疫抑制或免疫紊乱,我们考虑NHL可能通过某种机制逃避了机体的免疫监视和杀伤。而免疫逃逸机制的差异可能在决定NHL不同肿瘤类型中起到了关键作用。PD-L1和PD-L2是B7家族共刺激分子的重要成员。研究发现[2,3],多种恶性肿瘤细胞通过高表达PD-Ls,与其受体PD-1(programmed death-1,PD-1)结合传递负性调控信号,从而诱导肿瘤抗原特异性T细胞的凋亡和免疫无能,促使肿瘤的免疫逃逸。我们考虑NHL可能通过高表达B7家族,与其受体PD-1相互作用,从而介导肿瘤的免疫逃逸。本文主要检测PD-L1和PD-L2在NHL中的表达,并探讨其意义,旨在为NHL各淋巴瘤亚型寻找新的免疫治疗靶点。

    1 材料与方法

    1.1 试剂

    RPMI 1640培养基购自Solarbio生物公司;无支原体胎牛血清(fetal booine serum,FBS)购自杭州四季青公司;人AB血清由河南省中心血站提供;非必需氨基酸购自Thermo公司;人淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物公司;RNA提取试剂盒购自北京天根生物公司;逆转录试剂盒购自Fermentas;引物均由上海生工合成;SYBR Green Mixture购自北京康为世纪。

    1.2 细胞系及培养

    NKTL细胞系SNK-6及SNK-8由日本千叶大学Norio Shimizu教授惠赠,培养于含人AB血清(10%)和IL-2(1 000U/ml)的RPMI 1640培养基中。YTS细胞系由美国Mayo医学中心Scott Kaufmann教授惠赠,培养于含非必需氨基酸(1%)和FBS(10%)的RPMI 1640培养基中。急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat、间变大细胞淋巴瘤细胞系Karpas-299、皮肤T-NHL细胞系Hut-78、B-NHL细胞系LY-1和LY-8、Burkitt’s淋巴瘤细胞系Ramos均购自中国科学院上海细胞生物研究所,均用含FBS(10%)的RPMI 1640培养基培养 ......