吕海燕,刘传杰,黄建华

    (解放军总医院基础医学研究所免疫研究室,北京 100853)

    结直肠癌发病率和死亡率在世界范围逐年增高。由于其潜在的临床表现和早期症状的非特异性,40%～50%的新病例被诊断时已属晚期,导致手术治愈率低[1]。对于晚期结直肠癌患者尤其是老年患者,常规化疗在一定程度上虽可观察到疗效,却不能有效地提高整体生存率。此外,化疗的多重不良反应会严重影响患者的生活质量[2]。因此迫切需要确定新的针对结直肠癌的有效治疗策略。

    越来越多的证据表明[3-5],治疗肿瘤需要创建有效靶向杀灭肿瘤干细胞的新策略。到目前为止,所发现的肿瘤干细胞特异性标志物非常稀少,而CD133则是目前所发现肿瘤干细胞中最常见的标志物之一[6]。由此我们选定了CD133作为针对CD133阳性结直肠癌治疗研究的新靶点。

    本研究拟进行抗体与细胞因子活化杀伤(cytokine-induced killer,CIK)免疫细胞治疗技术的融合与创新,构建抗CD133/CD3双功能特异性抗体装备的CIK细胞作为效应细胞,为开展靶向治疗高表达CD133人结直肠癌的可行性研究奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞

    人结直肠癌细胞株SW620、HT29和LOVO均购于美国模式培养物集存库(American type culture collection,ATCC),并于本实验室保存。

    1.2 试剂

    无血清细胞培养基(RPMI1640;GIBCO公司,美国);胎牛血清(fetal bovine serum,FBS;HyClone公司,新西兰);鼠抗人CD3单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb;TaKaRa公司,日本);鼠抗人CD133-PE抗体和抗CD133(AC133)mAb(美天旎生物技术公司,德国);鼠抗人CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE、CD56-APC四标荧光标记抗体和同型对照IgG1(BD公司,美国);Traut’s试剂和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(SULFO-SMCC)试剂(赛默飞世尔科技公司,美国);人淋巴细胞分离液(天津灏洋生物制品科技有限责任公司);细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8;DojinDo公司);PD-10脱盐层析柱(安玛西亚公司,瑞典);人IFN-γ ELISA试剂盒(R＆D抗体公司,美国)。

    1.3 CIK细胞的培养 ......