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编号:300842
丹参酮Ⅱ对乳鼠窦房结细胞快激活延迟整流钾电流的作用
http://www.100md.com 2016年4月25日 中华老年多器官疾病杂志 2016年第4期
失活,电流密度,1材料与方法,1试剂,2溶液配制,3乳鼠窦房结细胞的分离与培养,4药物灌流方法,5全细胞膜片钳的电流记录,4统计学处理,2结果,1STS对乳鼠窦房结细胞起搏频率的作用,2STS对乳鼠窦房结细胞
     张 宇,傅义程,王 瑞,赵晓静,蔡钟奇,陈 曦,徐 斌,赵 颖,李 泱*

    (1解放军总医院心内科,北京 100853;2解放军第451医院门急诊科,西安 710054)

    心脏的正常起搏点位于窦房结[1],窦房结起搏细胞的自发性搏动调控心脏的正常生理活动,细胞膜上各种离子通道的复杂活动构成窦房结电生理机制的基础[2?4]。病态窦房结综合征[5,6]以≥65岁老年人多见,发病率约为0.17%。窦房结细胞(sinoatrial node cells,SNC)为节律性活动细胞,其动作电位(action potential,AP)幅度小,无动作电位平台,静息电位绝对值低,4期不稳定,存在缓慢地自动除极[7,8]。研究表明,快激活延迟整流钾电流(IKr)对于该类细胞的复极起着重要作用,直接关系到细胞的搏动频率,从而对心率和节律产生主要的作用。

    丹参酮Ⅱ(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)是从丹参根中提取并分离出的二萜醌类化合物,是丹参中的主要有效成分,具有抗心肌缺氧、抗心律失常功效[9?11]。但目前尚未知STS是否对SNCIKr电流存在作用。故本研究应用STS对IKr电流的作用,观察药物对其效应及可能的通道门控机制,以期为其降低病态窦房结综合征的发生机制提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 试剂

    DMEM细胞培养基(Thermo公司),胰蛋白酶1∶250、胰蛋白酶?EDTA消化液(Sigma公司),羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、二甲基亚砜(Amresco公司),胎牛血清(fatal bovine serum,FBS)、Opti-MEM无血清细胞培养基(Invitrogen公司)。

    1.2 溶液配制

    记录AP的电极内液(mmol/L):K-Aspartate 120,KCl 20,MgCl25,Na2ATP 5,HEPES 10,KOH调pH值至7.2。记录AP的细胞外液(mmol/L):NaCl 137,CaCl21.8,KCl 4,MgCl21,HEPES 10,葡萄糖10,pH值用NaOH调至7.4;记录IKr电流电极内液成分(mmol/L):KCl 130,MgCl21,MgATP 5,EGTA 5,HEPES 10,pH值用KOH调至7.2。记录IKr电流细胞外液(mmol/L):NaCl 110,KCl 30,CaCl21.8,MgCl21,HEPES 10,葡萄糖5,NaOH调pH值至7.4。并加入阻断剂4-AP 50μmol/L阻断超快激活钾电流(IKur) ......

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