田倪妮，魏 玲，李宏键，朱向情，田 青，李慧萍，陈 瑛，潘兴华*

    (1成都军区昆明总医院地方干部病房，昆明 650032；2昆明市第一人民医院心内科，昆明 650011；3云南省第一人民医院骨科，昆明 650034； 4云南省干细胞工程实验室，昆明 650032；5桂林医学院研究生学院，桂林 541000)

    心室重构的基础是心肌细胞及其细胞外基质、胶原细胞网等变化，其相关过程包括缺血、细胞坏死和凋亡等。成纤维细胞首先在粗面内质网的多聚核糖体上通过信使RNA合成多肽链，每3条前肽链经羟化装配成一条三股螺旋的前胶原分子，再经过糖化前胶原分泌到细胞外。再由前胶原肽酶切除前胶原的C端和N端前肽而形成胶原。因此Ⅰ型C端胶原前肽(carboxyterminal propeptide of typeⅠprocollagen,PⅠCP)可反映Ⅰ型胶原的合成。

    Klotho基因全长50 kb,包括4个内含子和5个外显子，人类的Klotho基因定位于第13号染色体(13q12)。Klotho是一种与衰老有关的基因，作为一种辅助因子/复合受体调节成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)23信号，影响细胞内信号通路，包括p53/p21、c-AMP、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)和Wnt信号通路。Klotho可保护内皮的机能障碍和调节一氧化氮的产生，其基因表达增加可抑制胰岛素信号和氧化应激，进而抑制衰老和延长寿命。

    本课题组通过观察慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者心肌Klotho基因的表达及PⅠCP的含量变化，讨论Klotho基因在CHF患者中的作用，及其与胶原的分泌、合成，以及心肌纤维化的可能关系。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    本实验样本取材于成都军区昆明总医院2013年8月至2014年8月心脏外科建立体外循环手术患者心肌的脱落组织，共计60例。所有病例均排除脑血管病、急性心肌梗死、严重肝肾功能不全等可能影响实验结果的疾病。根据纽约心脏联合会(New York Heart Association, NYHA)分级标准将60例患者分为：NYHAⅠ级组、NYHAⅡ级组和NYHAⅢ级组，每组各20例。所有标本及组织放入-80℃的超低温冰箱中备用。

    1.2 主要试剂和仪器

    1.2.1 试剂 离心柱型mRNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、荧光定量4.2×SYBR real-time PCR premixure(百泰克生物技术有限公司 ......