李 颖，华 岩，于 翔

    (山海关人民医院内分泌科，秦皇岛 066200)

    糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的一种严重并发症。在长期高血糖、高血脂和高血压的刺激下，肾小球微循环系统的微循环滤过压会异常增高，这导致DN发生和不断发展[1]。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)可以通过旁分泌途径分泌细胞因子、生长因子及神经营养因子等生物活性物质，具有抗凋亡、损伤修复、促再生和调节炎症反应等多种综合性作用[2]。有研究表明干细胞条件培养基具有促血管生成和调节神经功能的作用[3]。我们利用MSCs主要通过旁分泌的特点来提取和制作MSCs条件培养基，以研究其对DN的治疗和修复作用； 同时结合Alzet微量渗透泵可长效缓慢进行释放的特点，对DN大鼠模型进行治疗，观察其对DN大鼠的保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 药物和试剂

    SD大鼠骨髓MSCs 和MSCs专用培养基采购自赛业生物科技有限公司(美国)，达尔伯克改良伊格尔(Dulbecco’s modified eagle medium，DMEM)培养基和胰酶采购自HyClone公司，链脲佐菌素(streptozocin，STZ)购自Sigma公司。2ML2微量渗透泵购自美国ALZET公司。

    1.2 MSCs条件培养基的制备

    SD大鼠骨髓MSCs用MSCs专用培养基进行培养，约2 d更换1次细胞培养液传代，第3代MSCs在细胞培养融合度达到约90%时弃掉原培养基，更换为DMEM无血清培养基。在孵箱内培养24 h后收集上清液即为MSCs条件培养基。吸取上层条件培养基2 ml于Alzet微量渗透泵中即为MSCs条件培养基Alzet微量渗透泵。

    1.3 分组和方法

    30只清洁级SD 雄性大鼠[北京维通利华实验动物技术有限公司]，体质量(200±10)g，随机分为3组：正常组，DN模型组和MSCs条件培养基组，每组10只。正常组给予普通饲料喂养；DN模型组大鼠每天给予高脂高糖饲料(在普通饲料的基础上加上10%蔗糖、5%奶粉、20%猪油)；MSCs条件培养基组是对造模成功的DN大鼠植入Alzet微量渗透泵。

    DN模型大鼠高脂高糖饲料喂养8周后，腹腔一次性注射STZ(35 mg/kg)，配制方法：将STZ溶解于新鲜配制的0.1 mol/L的枸橼酸缓冲液中 ......