靳丽媛，邓子辉，张金英，杨 晨，司艺玲*，陈光辉*

    (解放军总医院：1心血管内科，2基础医学研究所，北京 100853)

    近年来，糖尿病已成为威胁全人类健康的主要慢性疾病，长期控制不佳的高血糖会导致严重的心、脑及肾脏并发症，造成极高的死亡率[1-3]。在糖尿病并发症的炎症反应中，巨噬细胞是一种重要的参与其炎症调节的免疫细胞[4-6]。巨噬细胞主要存在两种亚型：经典活化型(M1型)和选择活化型(M2型)。在不同微环境中，炎症介质刺激巨噬细胞活化，转化成不同的表型，同时分泌促炎或抗炎细胞因子参与炎症调节[7]。正常情况下，巨噬细胞M1和M2处于动态平衡以维持稳态，当发生糖尿病并发症的高糖慢性炎症时，M1和M2比例失衡，造成炎症级联反应，分泌大量炎症细胞因子，进一步加重细胞和组织的炎症损伤，若未能得到有效控制，将造成不可逆转的心、脑、肾功能损害[5,6,8]。近年的研究表明，间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)可以通过分泌的物质调节巨噬细胞极化，影响巨噬细胞功能，从而在多种免疫代谢疾病中起到治疗作用[9,10]。在糖尿病并发症的高糖慢性炎症中，MSCs的免疫调节机制尚不清楚。故本研究拟利用高糖联合脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)模拟糖尿病并发症的慢性炎症环境，探讨高糖炎症损伤条件下巨噬细胞的变化及MSCs培养上清对损伤的巨噬细胞表型极化的影响，旨在阐明糖尿病并发慢性炎症的致病机理及MSCs的干预机制，为MSCs防治糖尿病并发症提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    雄性SD大鼠15只：体质量120～150 g，10只；体质量80 g，5只。购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养环境为解放军总医院SPF级实验动物中心。

    1.2 试剂

    DMEM高糖和低糖培养液以及10 000 U/ml青霉素-10 000μg/ml链霉素(HyClone公司，新西兰)，胎牛血清(天津市灏洋生物技术公司)，LPS和Ⅰ型胶原酶(Sigma公司，美国)，50%葡萄糖和0.25%胰酶(Gibco公司，美国)。大鼠白细胞介素(interleukin，IL)-6、IL-10和前列腺素E2(prosta-glandin E2，PGE2)酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(R&D)，抗大鼠CD45和CD29(eBioscience公司，美国)，CD11b和CD90(BD公司 ......