张正斌，朱丽雯，谭延振，冯攀，张冰，吴岩，易蔚，王晓明，孙阳*

    (空军军医大学第一附属医院：1老年病科，3心血管外科，西安 710032；2陕西中医药大学第二临床医学院，咸阳 712000)

    间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有自我更新和多向分化的潜能，广泛用于组织损伤修复[1]。动物实验显示MSCs对心肌梗死(myocardial infarction,MI)疗效显著，但是临床实验表明自体干细胞移植治疗MI疗效不佳[2]。原因可能是动物实验中分离制备的是年轻供体来源的MSCs,而临床实验中使用的干细胞多为MI患者自体采集的衰老MSCs。而衰老干细胞增殖、分化、分泌等生物学功能下降[3]，因此，如何延缓衰老是提高MSCs修复能力的关键。C1q/TNF相关蛋白3(C1q/TNF-related protein 3,CTRP3)是新发现的脂肪因子，参与肝脏脂质代谢、缺血心肌保护、细胞增殖分化等生理病理进程[4,5]。Hou等[6]证实CTRP3通过激活磷酯酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)通路减轻缺血缺氧诱导的MSCs凋亡。本研究拟通过过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导构建MSCs衰老模型，探讨CTRP3对衰老MSCs抗损伤的作用并初步探讨其机制。

    1 材料与方法

    1.1 MSCs的培养

    小鼠来源的P5代骨髓MSCs购于广州赛业(MUBMX-01001)，细胞复苏后接种于含10%胎牛血清及1%双抗(链霉素和青霉素)的间充质干细胞专用培养基(MUBMX-90011，广州赛业)中，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

    1.2 CTRP3蛋白的制备

    CTRP3蛋白的制备方法同前[4]。CTRP3基因由GENEWIZ(江苏，中国)产生，并克隆到原核蛋白表达载体pET30a(Novagen，Merck)中。将表达载体转移到BL21(DE3)细菌中。BL21(DE3)/pET30a-CTRP3在LB培养基中生长并在37℃下振荡3 h。向培养基中加入异丙基-BD-硫代半乳糖苷(终浓度：1 mmol/L)。将溶液在16℃下振荡4～5 h，并以5 000转/min离心。通过HisTrap HP纯化蛋白质，除去内毒素后将蛋白质脱盐浓缩。

    1.3 MSCs衰老模型的建立 ......