曹媛媛，邓加雄，李桂成，艾晨牧，李云峰

    (湖南省郴州市第一人民医院重症医学科，郴州 423000)

    脓毒症是临床常见危重症，而血管通透性增加导致的全身浮肿是脓毒症的主要症状，也是临床工作中亟待解决的问题之一[1]。血管内皮细胞激活是导致血管通透性增加的主要机制[2,3]。研究证实京尼平在调节血管内皮细胞功能、改善心血管疾病方面具有显著作用[4,5]，但其对于脓毒症血管通透性增加的作用尚未见报道。本课题组前期证实线粒体凋亡信号通过激活天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cysteine-containing aspartate-specific proteases 3,caspase-3)裂解内皮细胞紧密链接β-catenin蛋白，介导内皮通透性增加，而抑制内皮细胞凋亡信号激活可以减轻血管通透性增加[6]。且研究证实沉默信息调节因子1(silent information regulator 1，SIRT1)参与调节脂多糖介导的内皮屏障功能[7]，但机制并未阐述清楚。因此本研究通过体内及体外脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理模拟脓毒症血管通透性增加，观察京尼平对血管通透性的影响并研究其相关机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    FITC-白蛋白、京尼平及EX527购于美国Sigma公司；TUNEL检测试剂盒、线粒体膜电位JC-1试剂盒、caspase-3活性检测试剂盒及线粒体分离试剂盒购于美国Biovision公司；Sirtuin-1蛋白(SIRT1)单克隆抗体、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatede hydrogenase,GAPDH)及辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗购于美国ABclonal公司。人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)购于广州赛库生物公司。

    1.2 分组及处理

    1.2.1 体外实验 参照文献[7]，HUVECs分为4组：对照组细胞仅接受0.1%二甲基亚砜(DMSO)处理24.5 h；模型组细胞接受0.1%DMSO预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育24 h；治疗组细胞接受京尼平50 μmol预处理30 min后同模型组；抑制剂组细胞接受10 μmol EX527及京尼平50 μmol预处理30 min后同模型组。

    1.2.2 体内实验 雌性SD大鼠24只，采用随机数表法分为4组(n=6)：对照组大鼠经尾静脉注射0.5 ml DMSO 30 min后注射生理盐水0.5 ml ......