王争，裴小华，赵卫红

    (南京医科大学第一附属医院老年肾科，江苏省老年医学重点实验室，南京 210029)

    近年来，慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的患病率逐年增高，已成为一个重大的公共卫生问题[1]。其中，肾小管间质纤维化是CKD进展至终末期肾病的关键过程。微小RNA(miRNA,miR)是一类内源性短链(21～25个核苷酸)非编码RNA，可以在转录后水平负向调控mRNA，抑制转录，广泛参与肾脏的生理和病理过程[2]。既往研究发现，miRNA参与了自噬的调节过程，在肿瘤、衰老、纤维化等发生发展过程中发挥重要作用。微管相关蛋白-轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)是自噬的标记蛋白，在自噬过程中LC3-Ⅰ可募集磷脂酰乙胺醇形成LC3-Ⅱ，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的大小可反映自噬小体的合成情况。在miRNA家族中，miR-200c定位于染色体12p13.31上，其在多种器官纤维化中均有参与，但作用机制仍不清楚。另外，Smad蛋白是转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导纤维化作用的关键细胞内效应分子，其中Smad2和Smad3具有较高的同源性，在许多细胞中都可以被TGF-β1激活；钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)减少或缺失是上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的标志性变化；同时α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的重新表达或表达水平增加说明上皮细胞形态学发生了转化。本研究以TGF-β1刺激人肾近曲小管上皮细胞HK2，体外构建纤维化细胞模型，探索miR-200c对小管细胞中自噬变化的调节，为延缓肾小管间质纤维化提供新的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人肾脏近曲小管上皮细胞HK-2(ATCC，美国) ......