程晓蔚,朱庆磊

    (1解放军医学院,北京 100853;2中国人民解放军总医院第六医学中心心血管病医学部心血管病研究所,北京 100853)

    心肌细胞肥大是指心脏在受到刺激时发生的适应性改变,包括生理性和病理性两种类型。细胞肥大是一种对外界刺激的适应性反应,但病理性肥大一般会进展为心力衰竭,是心脏疾病向心力衰竭进展的必然过程[1]。心肌细胞肥大伴随着质的变化,即基因表达的改变,引起代谢、收缩力和心肌细胞存活的改变。不同类型的心肌细胞肥大受到不同的细胞信号通路的调节。研究表明,细胞代谢、增殖,非编码RNA,免疫反应,翻译调节和表观遗传修饰等,对心肌细胞肥大有积极或消极的调节作用[2]。然而,目前关于心肌细胞肥大的发病机制还未完全阐明,在临床上缺乏有效的治疗手段,因此,探索病理性心肌细胞肥大发生的潜在机制,寻找新的药物作用靶点,改善病理性心肌细胞肥大具有重要意义。本研究通过异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大[3-5],研究其线粒体自噬水平和线粒体三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)敏感钾通道Kir6.1的变化规律,为病理性心肌细胞肥大提供新的防治思路。

    1 材料与方法

    1.1 试剂及仪器

    异丙肾上腺素(isoprenaline, ISO)购于Sigma;进口胎牛血清购于Bovogen Biologicals;细胞高糖培养基、Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶购于Gibco;大鼠氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide, NT-proBNP)酶联免疫吸附测定试剂盒,购于生工生物工程(上海)股份有限公司;RNA提取试剂Trizol购于美国Invitrogen;反转录试剂盒iScript cDNA Synthesis Kit、iTaq Universal SYBR Green Supermix购于美国Bio-Rad;引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成;RIPA细胞裂解液、蛋白磷酸酶抑制剂混合物、BCA蛋白定量试剂盒购于北京索莱宝科技有限公司;甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)抗体、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3)抗体购于Abcam;FUN14结构域蛋白1(FUN14 domain-containing protein 1, FUNDC1)抗体购于Cell Signaling Technology;内向整流钾通道6.1(inward rectifyimg potassium channel 6.1, Kir6.1)抗体购于武汉三鹰生物科技有限公司;超敏化学发光试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司 ......