盐藻cbr基因启动子及其3′-非翻译区序列的克隆
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关键词 盐藻;胡萝卜素生物合成相关基因;启动子;3:非翻译区
中图分类号 Q781
摘要 目的:克隆盐藻cbr基因启动子和3:非翻译区(3-′UTR)片段。方法:设计2对引物,通过1轮巢式PCR反应,扩增cbr基因启动子,其中首轮PCR反应使用改良的降落PCR程序,第二轮巢式PCR反应的模板是第一轮 PCR产物,使用普通.PCR程序;cbr基因3′-UTR片段的克隆采用一对引物,通过一般PCR程序得到。结果:通过巢式PCR得到长约1.1 Lb的cbr基因启动子片段,DNA测序结果表明碱基序列与文献记载完全相同,尤任何碱基突变;克隆的K 0.3 kb,的cbr基因3-′UTR片段经人工比较,与收录的序列吻合,无碱基突变。结论:利用普通Taq酶对用PCR方法克隆得到了盐藻胡萝卜素生物合成相关基因cbr的2个基冈表达调控序列;结合使用巢式PCR和改良降落PCR,可以非常有效地克隆具有复杂二级结构的DNA片段;通过两端人工添加的限制序列,将cbr基因启动子和3-′UTR 2个调控片段构建到同一个载体上,形成cbr基因表达盒,为构建转基因盐藻表达载体打下了基础。
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