脱细胞异种真皮基质与自体薄皮片复合移植的实验研究及临床应用
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[摘要]目的 为临床创面修复寻求一种新的经济实用的永久覆盖物。 方法 取健康活杀小猪断层皮片，经特殊处理去除表皮和真皮中的细胞成分，制成脱细胞异种真皮基质。将真皮基质与自体薄皮片移植于SD大鼠深度创面及临床2例深度烧伤切痂创面。 结果 动物实验及临床应用均未见真皮基质排异反应，临床2例皮片全部成活。动物实验组皮片成活率(88.76±2.40)%，对照组皮片成活率(90.01±1.74)%，两者无显著性差异(t=1.62，P>0.05)。脱细胞异种真皮基质与自体薄皮片复合移植成功后皮片无明显瘢痕增生，外观与周围皮肤相近。 结论 脱细胞异种真皮基质与自体薄皮片复合移植物是一种较理想的创面永久覆盖物，具有广泛的应用前景。
[关键词] 脱细胞异种真皮基质;复合移植;临床研究
A experimental and clinical study on composite transplantation ofxenogenic acellular dermal matrix with thin autogenic skin
WANG Lei，Tan Qian，Ning Guan-sen，Lin He，Zhou Zhong-tao，Yao Qing，Pan Yin-gen
(1.Department of Plastic and Burn Surgery，Zhongda Hospital，Southeast University，Nanjing210009，China;2.Department of Plastic and Burn Surgery，Drum Tower Hospital，Nanjing210008，China;3.Department of Plastic and Burn Surgery，Nanjing First Hospital，Nanjing210006，China;4.Department of Pathology，Zhongda Hospital，Southeast University，Nanjing210009，China;5.Department of Plastic and Burn Surgery，Qidong People′s Hospital，Qidong226200，China)
Abstract:Objective To develop a new and cheaper permanent material for clinical wound covering.Meth-ods Xenogenic acellular dermal matrix was made from fresh pig skin which had removed the cells and the cell de-bris by some extraordinary methods.It was grafted together with thin autogenic skin in the deeper wounds of rats and2cases of burning wounds after eschar excision.Results There was no rejection to xenogenic acellular dermal ma-trix.The composite transplantation of2patients was successful.The take rate of animal experimental group was(88.76±2.40)%and control group was(90.01±1.74)%，but there was not statistically significant(t=1.62，P>0.05).Composite skin had well-acceptable color and quality compared to nearby skin.Conclusion Xenogen-ic acellular dermal matrix with thin autogenic skin is a ideal permanent material for clinic wound covering and its clinical application has a good prospect.
Key words:xenogenic acellular dermal matrix;composite transplantation，clinical study
在大面积深度烧伤治疗过程中，以往采用的网状 植皮、邮票植皮、微粒植皮及直接自体薄层皮片移植等方法，都存在皮片瘢痕增生、缺乏弹性等缺点。我们将健康活杀小猪断层皮片特殊处理，制成脱细胞异种真皮基质，与自体薄层皮片复合移植于大鼠创面，并临床应用于2例患者，克服了以往植皮手术的缺点，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 脱细胞异种真皮基质的制备
用50kg左右健康白色小猪，活杀后剃毛洗净皮肤，剥下大张皮，在电动取皮机上取下0.3～0.5mm厚的断层皮片，用洗必泰液消毒后浸入生理盐水24h，轻轻撕去表皮，戊二醛交联后，以含胰蛋白酶为主要成分的脱细胞液脱去细胞，生理盐水冲洗后包装备用。
1.2 动物
成年SD大鼠，体重200～250g(由东南大学医学院实验动物中心提供)，雌雄不限，共30只。
1.3 实验方法
大鼠采用氯胺酮腹腔麻醉[10mg·(100g)-1 ]，麻醉后剃除背毛。30只大鼠随机分为2组，每组15只。复合皮移植组为实验组，单用薄皮片移植组为对照组。先于大鼠背部切取3cm×4cm的全厚皮片，用鼓式取皮机将全厚皮片变成厚约0.2mm的薄层皮片。实验组在创面上移植脱细胞异种真皮基质后覆盖大鼠自体薄层皮片，缝合固定;对照组将大鼠自体薄层皮片直接覆盖创面，缝合固定。两组皮片上均用凡士林纱布和干纱布覆盖，妥善包扎固定。术后观察两组皮片外观，并于1、2、3、4、6、8周分别切取实验组全厚皮片进行组织学观察。
1.4 临床应用
2例患者均选取双上肢对应部位的Ⅲ度烧伤创面，切痂后一侧创面用复合皮移植，面积分别为5cm×10cm和6cm×8cm，另一侧用自体薄皮片移植，面积分别为7cm×8cm和9cm×8cm。外用凡士林纱布和干纱布加压包扎。术后观察两组皮片外观，并于第4周切取复合皮移植部位全厚皮片进行组织学观察。
2 结 果
2.1 皮片成活率
实验组皮片成活率为(89.79±2.34)%，对照组为(90.15±2.89)%，两组差异无显著意义(t=1.62，P>0.05)。临床2例皮片全部成活。
2.2 皮片外观
术后成活的复合皮片无明显瘢痕增生，外观较厚 实，与周围正常皮肤颜色接近，弹性良好，相当于中厚皮片移植效果。而单纯薄皮片移植成活后皮片有不同程度瘢痕增生，并伴有色素沉着，弹性差。
2.3 光镜观察结果
2.3.1 实验组
第1周脱细胞异种真皮基质周围炎症细胞浸润明显，炎症细胞以中性粒细胞为主，有少许淋巴细胞;第2、3周炎症细胞逐渐减少，第4周基本消失，第5～8周已无炎症细胞。第1～8周均未见排异反应;第2周开始有毛细血管长入，以后逐渐增多。
2.3.2 临床病例
移植第4周自体表皮与脱细胞异种真皮基质结合紧密，基底膜完整。有大量毛细血管长入，毛细血管周围可见少量淋巴细胞浸润(图1)。
3 讨 论
深度创面的修复一直是人们研究的热点，自体薄皮片、中厚皮片、全厚皮片以及皮瓣都因有不足之处而应用受到限制。1995年，Livesey等[1] 首先报告脱细胞真皮研制成功，Wainwright [2] 用人的皮肤制成脱细胞真皮并成功用于Ⅲ度烧伤创面，继之国内外出现类似报告[3～6] 。但脱细胞异体真皮有传染疾病的可能，且来源不足，因此，限制了其临床应用。人们继而把目光转向了异种真皮。较理想的皮肤覆盖物应该具备以下几个条件:来源充足、经济耐用、无排异性、柔韧性好、耐压耐磨、安全无毒等。猪的真皮经特殊处理后与自体薄皮片复合移植，则完全符合上述条件。
由于脱细胞异种真皮基质含有天然毛孔，移植后早期创面纤维蛋白渗出液通过毛孔渗入表皮下并营养表皮，中后期由长入的毛细血管营养表皮[7] ，因此，本动物实验和临床结果均显示复合移植与单用自体薄皮片移植的皮片成活率是基本相同的。
脱细胞异种真皮基质衬垫于自体表皮下，使复合皮外观较厚实，弹性好，且因真皮基底膜完整，与表皮结合牢固，一定程度上抑制了瘢痕的增生。
复合皮移植早期有炎症反应，以后渐消退，但从皮片成活率和创面愈合速度就不难看出，这种炎症反应对移植无不良作用。由于始终未见机体排异反应，说明脱细胞异种真皮基质应用于人体是可行的和安全的。
综上所述，脱细胞异种真皮基质与自体薄皮片复合移植对于深度创面的修复是一种较理想的治疗方法，具有广泛的应用前景。
[参考文献]
[1]LIVESEY S A，HERNDON D N，HOLLYOAK M A，et al.Trans-planted acellular allograft dermal matrix.Potential as a template for the reconstruction of viable dermis[J].Transplantation，1995，60: 1.9.
[2]WAINWRIGHT D J.Use of an acellular allograft dermal matrix in the management of full-thickness burns[J].Burns，1995，21:243.244.
[3]SOEJIMA K，NOZAKI M，SASAKI K，et al.Reconstruction of burn deformity using artificial dermis combined with thin split-skin graft-ing[J].Burns，1997，23:501.504.
[4]孙永华，李迟，王春元，等.脱细胞异体真皮与自体薄皮片移植的研究与应用[J].中华整形烧伤外科杂志，1998，14:370.373.
[5]MUNSTER A M，SMITH.MEEK M，SHALOM A.Acellular al-lograft dermal matrix:immediate or delayed epidermal coverage?[J].Burns，2001，27:150.153.
[6]张明利，王莹，王大为，等.脱细胞异种真皮基质作为填充材料的初步研究与应用[J].中华整形外科杂志，2002，18:263.265.
[7]冯祥生，谭家驹，杜永军，等.自体网状皮片与异种脱细胞真皮基质复合移植的临床应用[J].中华整形烧伤外科杂志，2002，18:269.270.
(1.东南大学附属中大医院烧伤整形外科，江苏南京 210009;2.南京大学附属鼓楼医院烧伤整形外科，江苏南京 210008;3.南京市第一医院烧伤整形外科，江苏南京 210006;4.东南大学附属中大医院病理科，江苏南京 210009;5.启东市人民医院烧伤整形外科，江苏启东 226200)
[基金项目] 东南大学医学基金资助项目(XY.0026.033)。
[作者简介] 王磊(1967-)，男，浙江宁波人，主治医师，在读硕士研究生。
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