ＲｅｇⅣ基因在大肠癌中抗凋亡作用的体外研究(2)
Lovo细胞系未见表达。免疫组织化学染色显示。HT-29 RegⅣ蛋白表达阳性，Sw480细胞表达较HT-29略弱，Caco2表达弱阳性，Lovo细胞表达阴性。
2.2 姜黄素对细胞生长的抑制作用
不同浓度的姜黄素对HT-29、Caco2、Sw480、Lovo细胞的IC卯分别为46.8,40.1、28.1和18.2μmol·L-1。不同浓度的姜黄素对Lovo细胞生长抑制最强，对HT-29细胞生长抑制最弱，Cac02和Sw480介于二者之间。
2.3 不同大肠癌细胞的凋亡率
用浓度为20μm0lL-1的姜黄素干预24h后HT-29、Caco2、Sw480和Lovo细胞的凋亡率。
3 讨论
, 百拇医药
RegⅣ为Reg家族最新成员，于2001年被发现。人的RegⅣ基因位于1号染色体，属于单拷贝基因，有5个内含子及6个外显子，编码158个氨基酸，包括22个氨基酸的信号肽及一个保守的钙依赖碳氢化合物识别域。Zhang等报道，RegⅣmRNA在结直肠腺瘤一癌进程中丰度最高，认为RegⅣ过度表达可能是结直肠癌发生的早期事件。
本实验用RT-PCR和免疫组织化学染色方法对4种大肠癌细胞系进行RegⅣ基因表达水平检测，结果显示：具有黏液分泌表型的腺癌细胞系HT-29细胞的胞质中高表达RegⅣmRNA及其蛋白，而类似于小肠上皮细胞无黏液分泌的Cac02细胞的RegⅣmRNA及其蛋白表达介于HT-29和Sw480细胞之间；Sw480低表达RegⅣmRNA及其蛋白，而高转移性的Lovo细胞系不表达RegⅣmRNA及其蛋白。本课题组高峰等基因转染结果和Violette等的研究均证实了HT-29细胞系RegⅣ基因高表达，Lovo细胞系不表达RegⅣ基因；在大肠上皮分化的黏液性肿瘤细胞(HT-29)中RegⅣ高表达；非黏液性肿瘤细胞(cac02和Sw480)或高转移性的(Lovo)癌细胞RegⅣ基因表达程度降低。这一特性可能与癌细胞分化程度有关。由于高分化的HT-29细胞与正常大肠上皮细胞相似，具有分泌黏液和糖蛋白的功能，而RegⅣ蛋白存在于分泌的黏液中，所以失去分泌黏液功能的细胞，同时也失去了RegⅣ蛋白表达，说明RegⅣmRNA和蛋白表达与大肠癌的分化程度有关，很可能在癌的启动阶段起作用。
, 百拇医药
细胞凋亡在肿瘤发生、发展过程中主要起负调控作用，可以阻遏肿瘤细胞迅速生长。据报道，RegⅣ与Reg I同属Reg家族，同源性较强，功能相近，同样都在结直肠癌中表达上调，组织发育异常时高表达。目前认为，RegⅣ基因引导一种生理过程，这种过程会关闭凋亡信号的开关。Reg蛋白是除了表皮生长因子，转化生长因子α、β和肝细胞生长因子之外的另一个对胃细胞再生起作用的基因蛋白。Ose等的研究进一步揭示了鼠RegⅣ的促进增殖和再生作用是小肠绒毛增殖和修复所必需的。Reg Iα基因的表达还提示胃黏膜的再生进程。故推测RegⅣ也具有促进增殖和再生作用，其机制可能是通过抗凋亡途径。姜黄素可以诱导细胞凋亡，20μmol·L-1姜黄素作用细胞24-36h后，DNA电泳可出现凋亡特异性的梯形条带，细胞的形态学也发生相应的改变，可以见到凋亡小体。本实验用同一浓度的促凋亡剂姜黄素作用于4种不同程度表达RegⅣ的癌细胞后，结果显示癌细胞的生长抑制率大小依次为LovoLovo>Sw480>Cac02>HT-29，而癌细胞的凋亡率大小依次为Lovo>Sw480>Cac02>HT-29：在癌细胞RegⅣmRNA和蛋白表达从高到低依次是HT-29>Cac02>Sw480>Lovo。高表达RegⅣ的癌细胞能明显抵抗促凋亡剂姜黄素的作用，而无RegⅣ表达的细胞在姜黄素应用后细胞凋亡明显增加。说明RegⅣ具有抗凋亡作用，因此，RegⅣ有可能也是一个抗凋亡因子，可能通过抑制凋亡促进肿瘤细胞的生长。
Violette等研究结肠癌耐药相关基因时发现，RegⅣmRNA过度表达可能与结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤的耐药有关，其作用机制有待于进一步研究。
[ 上 页 ], http://www.100md.com(郑声琴 何 杰等)
2.2 姜黄素对细胞生长的抑制作用
不同浓度的姜黄素对HT-29、Caco2、Sw480、Lovo细胞的IC卯分别为46.8,40.1、28.1和18.2μmol·L-1。不同浓度的姜黄素对Lovo细胞生长抑制最强，对HT-29细胞生长抑制最弱，Cac02和Sw480介于二者之间。
2.3 不同大肠癌细胞的凋亡率
用浓度为20μm0lL-1的姜黄素干预24h后HT-29、Caco2、Sw480和Lovo细胞的凋亡率。
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RegⅣ为Reg家族最新成员，于2001年被发现。人的RegⅣ基因位于1号染色体，属于单拷贝基因，有5个内含子及6个外显子，编码158个氨基酸，包括22个氨基酸的信号肽及一个保守的钙依赖碳氢化合物识别域。Zhang等报道，RegⅣmRNA在结直肠腺瘤一癌进程中丰度最高，认为RegⅣ过度表达可能是结直肠癌发生的早期事件。
本实验用RT-PCR和免疫组织化学染色方法对4种大肠癌细胞系进行RegⅣ基因表达水平检测，结果显示：具有黏液分泌表型的腺癌细胞系HT-29细胞的胞质中高表达RegⅣmRNA及其蛋白，而类似于小肠上皮细胞无黏液分泌的Cac02细胞的RegⅣmRNA及其蛋白表达介于HT-29和Sw480细胞之间；Sw480低表达RegⅣmRNA及其蛋白，而高转移性的Lovo细胞系不表达RegⅣmRNA及其蛋白。本课题组高峰等基因转染结果和Violette等的研究均证实了HT-29细胞系RegⅣ基因高表达，Lovo细胞系不表达RegⅣ基因；在大肠上皮分化的黏液性肿瘤细胞(HT-29)中RegⅣ高表达；非黏液性肿瘤细胞(cac02和Sw480)或高转移性的(Lovo)癌细胞RegⅣ基因表达程度降低。这一特性可能与癌细胞分化程度有关。由于高分化的HT-29细胞与正常大肠上皮细胞相似，具有分泌黏液和糖蛋白的功能，而RegⅣ蛋白存在于分泌的黏液中，所以失去分泌黏液功能的细胞，同时也失去了RegⅣ蛋白表达，说明RegⅣmRNA和蛋白表达与大肠癌的分化程度有关，很可能在癌的启动阶段起作用。
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细胞凋亡在肿瘤发生、发展过程中主要起负调控作用，可以阻遏肿瘤细胞迅速生长。据报道，RegⅣ与Reg I同属Reg家族，同源性较强，功能相近，同样都在结直肠癌中表达上调，组织发育异常时高表达。目前认为，RegⅣ基因引导一种生理过程，这种过程会关闭凋亡信号的开关。Reg蛋白是除了表皮生长因子，转化生长因子α、β和肝细胞生长因子之外的另一个对胃细胞再生起作用的基因蛋白。Ose等的研究进一步揭示了鼠RegⅣ的促进增殖和再生作用是小肠绒毛增殖和修复所必需的。Reg Iα基因的表达还提示胃黏膜的再生进程。故推测RegⅣ也具有促进增殖和再生作用，其机制可能是通过抗凋亡途径。姜黄素可以诱导细胞凋亡，20μmol·L-1姜黄素作用细胞24-36h后，DNA电泳可出现凋亡特异性的梯形条带，细胞的形态学也发生相应的改变，可以见到凋亡小体。本实验用同一浓度的促凋亡剂姜黄素作用于4种不同程度表达RegⅣ的癌细胞后，结果显示癌细胞的生长抑制率大小依次为LovoLovo>Sw480>Cac02>HT-29，而癌细胞的凋亡率大小依次为Lovo>Sw480>Cac02>HT-29：在癌细胞RegⅣmRNA和蛋白表达从高到低依次是HT-29>Cac02>Sw480>Lovo。高表达RegⅣ的癌细胞能明显抵抗促凋亡剂姜黄素的作用，而无RegⅣ表达的细胞在姜黄素应用后细胞凋亡明显增加。说明RegⅣ具有抗凋亡作用，因此，RegⅣ有可能也是一个抗凋亡因子，可能通过抑制凋亡促进肿瘤细胞的生长。
Violette等研究结肠癌耐药相关基因时发现，RegⅣmRNA过度表达可能与结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤的耐药有关，其作用机制有待于进一步研究。
[ 上 页 ], http://www.100md.com(郑声琴 何 杰等)