川芎嗪洗脱支架对猪冠状动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响(1)
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[摘要] 目的 观察川芎嗪洗脱支架(TES)对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法 在6只小型猪冠状动脉分别植入TES与金属裸支架(BMS)，术后第28天处死动物，用组织病理学方法检测内膜增殖情况，用免疫组化和TUNEL 法观察TES对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。结果 TES组较BMS组冠状动脉管腔面积增加、支架内新生内膜面积和面积再狭窄百分比减小(P
选用4~6月龄，质量为25~35 kg的小型猪6只，随机分为TES组和BES组，手术前1 d给予阿司匹林300 mg、氯吡格雷300 mg顿服。
1.2 支架和涂层
TES组的TES是由金属裸支架(BMS)经喷涂川芎嗪单体(四甲基砒嗪纯度为99%,购于上海华美制药厂)制成，为双涂层，其内层为甲基丙烯酸甲酯共聚物及川芎嗪颗粒，质量比为50∶50，涂层厚度为210～310 μm，含川芎嗪200 μg，外层为聚乙醇酸(PGA)。BMS组采用相同结构金属裸支架。两组支架均为不锈钢316 L金属管形网状支架，支架大小均为(2.5～3.0)/16 mm。
1.3 冠脉内支架植入
猪术前予氯胺酮12 mg•kg-1肌肉注射基础麻醉，3%戊巴比妥钠20 mg•kg-1术前和术中间断静脉注射强化麻醉。备皮及皮肤消毒后穿刺股动脉，插入6 F动脉鞘，注入肝素150~200 U•kg-1，常规行冠状动脉造影，为避免局部药物释放干扰，对同一头猪左前降支中段及回旋支各植入2枚相同类型的支架，支架球囊与血管直径比值为(1.1~1.2)∶1，10~15 atm(1 atm=101.325 kPa)扩张30 s，形成冠状动脉狭窄模型[2]。术后每日喂阿司匹林100 mg、氯吡格雷75 mg，并予普通饮食喂养。
1.4 支架内再狭窄的分析
术后第28天行冠状动脉造影后处死动物，剥离冠状动脉，固定24 h后切片、染色。对内膜、中膜和外膜进行组织学分析，应用计算机图像分析系统测定血管狭窄程度。
1.5 免疫组化测定增殖细胞核抗原(PCNA)
组织切片脱蜡至水，用3%H2O2灭活内源性过氧化物酶，PBS洗涤，置入柠檬酸盐缓冲液中放入微波炉，95 ℃维持10 min。滴加1∶50稀释的鼠抗人PCNA(DaKo公司产品)4 ℃过夜，PBS洗涤后滴加EnVision TM试剂(DaKo公司产品)，37 ℃放置30 min,PBS洗涤，滴加0.05% DAB后再加0.01% H2O2，显色5～15 min，镜下控制终止显色反应。最后苏木素衬染，常规脱水，封片镜检。每个标本观察8个高倍镜视野，计数阳性细胞数占总观察细胞数的百分比。, http://www.100md.com(李 璇 马根山 陈 忠 苏亚民)