兔Oddi氏括约肌细胞BK通道A1pha亚基在 Pichia酵母中的高效表达、纯化和鉴定
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摘要：目的 用巴斯德毕赤酵母系统表达兔Oddi氏括约肌(SO)细胞BK通道a亚基，并进行纯化和鉴定。方法 采用RT—PCR扩增编码兔SO细胞BK通道。亚基B细胞表位区基因的cDNA，经测序正确将其克隆入酵母表达载体 pPIC9K，以电穿孔法转化酵母GS115。经MD平板筛选重组子、G418筛选鉴定后，甲醇诱导表达，镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化，进行SDS—PAGE和免疫印迹分析。结栗 用RT—PCR扩增出约1 497bp的兔SO细胞BK通道。亚基基因的cDNA。序列分析显示，扩增序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道。亚基的cDNA序列完全一致。SDS—PAGE显示本系统表达的a亚基融合蛋白Mr约为55 000，表达量约为55 mg/L，纯度为96%。Western blot检测证明，该。亚基融合蛋白可与兔BK通道。亚基多克隆抗体特异性结合。结论 克隆了编码兔SO细胞BK通道a亚基B细胞表位区基因的cDNA，并在毕赤酵母中成功地表达了该蛋白，为进一步研究BK通道提供了物质基础。
关键词：Pichia酵母；BK通道Alpha亚基；分泌表达
中图分类号：R392.111
文献标识码：A
文章编号：1671—8259(2005)03—0212—04
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