霜天蛾cDNA表达文库的构建和初步鉴定

http://www.100md.com 2005年6月1日 孙秀珍 刘 昀

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     摘要：目的 构建霜天蛾cDNA表达文库，为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法 利用 Trizol法抽提霜天蛾RNA，经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA，反转录合成ds cDNA，连接EcoRI接头，末端磷酸化，XhoI消化，将双末端黏性化的双链dscDNA经过凝胶柱层析，收集大于400bp的cDNA片段，加工后与 Uni—ZAPXRVector连接，经过体外包装，感染宿主菌，构建cDNA文库，检测文库容量和重组效率，并采用PCR方法对插入的cDNA片段大小进行分析。结果 成功构建了一个含有5 X10⁵重组子的霜天蛾表达文库，重组率为67%，平均插入片段长度约为1.49kb。结论 所建文库容量及插入片段大小合适，适用于筛选目的cDNA克隆。

    关键词：霜天蛾；cDNA表达文库；鉴定

    中图分类号：R593.1

    文献标识码：A

    文章编号：1671—8259(2005)03—0244—03

    http://www.100md.com/html/paper/1671-8259/2005/03/14.htm

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