LAPTM4B对人肝癌细胞SMMC—7721的细胞生长的研究(2)
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参见附件。
1.8统计学处理。所有数据均采用Excel 2007，所有定量实验均重复3次，各组数据以“均值±标准差”表示(实验结果中未用“均值±标准差”表示)。组间比较用t检验，P<0.05代表差别显著。
2实验结果
2.1转染细胞的LAPTM4B基因的检测。将实验分为对照组即不做任何处理的肝癌细胞SMMC-7721组，Mock组即转染空载质粒pcDNA3的细胞组，实验组即转染重组质粒pcDNA3-LAPTM4B的细胞组，通过RT-PCR检测LAPTM4B基因的mRNA表达水平。如图1所示，转染重组质粒pcDNA3-LAPTM4B后，细胞内的LAPTM4B的mRNA表达水平显著增加，而对照组和Mock组的mRNA表达水平不变。通过WesternBlot实验检测细胞内LAPTM4B的蛋白表达水平，如图2所示，转染重组质粒pcDNA3-LAPTM4B后，细胞内的LAPTM4B的蛋白表达量明显上调，而对照组和Mock组的蛋白水平不变。
2.2MTT检测SMMC-7721细胞的体外存活率。实验结果如图3所示，实验组的处理，SMMC-7721细胞的生长速度明显快于对照组和Mock组。
2.3流式检测SMMC-7721细胞的细胞周期变化。流式细胞仪分析显示实验组的S期细胞数为比对照组和Mock组增多，而实验组的G0～G1期细胞少于对照组和Mock组。
2.4WesternBlot检测细胞周期蛋白cyclinD1、cyclinE的表达量。结果如图5所示，实验组的细胞周期蛋白cyclinD1、cyclinE明显上调。
3讨论与展望
肝癌的发生是由多基因、多因素参与，不同基因在不同时期的表达及功能发生紊乱的复杂过程[4]。目前发现的与肝癌发生、发展有着密切关系的基因还不多，寻找新的肝癌相关基因并深入研究这些基因在肝癌发生、发展过程中的作用 ......
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