柯萨奇B3病毒VP1蛋白的诱导表达(2)
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参见附件。
1.2.7VP1蛋白的Western blot鉴定。将获得的全菌、上清和沉淀的蛋白样品，分别取样品进行SDS-PAGE电泳后，将凝胶蛋白带电转移至硝酸纤维素膜上，脱脂乳37℃封闭2h。洗膜后按1∶2000稀释GST单抗，37℃孵育1h。洗膜后加HRP标记的山羊抗鼠IgG(1∶5000稀释)，37℃孵育1h，洗涤，经ECL显色后扫膜。
2结果
2.1VP1基因的PCR扩增。1%琼脂糖凝胶电泳表明，用所合成的特异性引物VP1-F和VP1-R进行PCR扩增，在约702bp处有一特异性条带，与预期目的片段长度一致，测序结果表明其序列与GenBank公布的CVB3序列一致。
2.2PMD18-T/VP1重组质粒的鉴定。重组质粒PMD18-T/VP1菌液PCR和酶切后经琼脂糖电泳可见与预期大小相符的条带。菌液测序结果与目的片段序列一致性为100%。
2.3重组质粒pGEX-VP1的鉴定。重组质粒pGEX-VP1菌液PCR和酶切后经琼脂糖电泳在702bp处可见与预期大小相符的条带(图1)。菌液测序结果与目的片段序列一致率为100%。
2.4原核蛋白的诱导表达 ......
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