苦参碱对早幼粒白血病HL—60细胞凋亡的影响(2)
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参见附件。
1.4.3 流式细胞术检测苦参碱诱导HL60细胞的凋亡率以0.5、1.0、2.0mg/mL浓度的苦参碱作用72h后分别收集HL60细胞。按照试剂盒说明操作，PBS洗涤2次，用结合缓冲液将细胞浓度调整为1×106/ml，取100ml加5ulAnnexin-V和10ulPI溶液，混匀。室温避光孵育15分钟后加入400ul缓冲液，上机检测。
1.4.4 凋亡相关基因Bcl-2的mRNA表达检测。根据NCBI Gene banck中cDNA序列，按照互补原则，兼并Tm值、C+G含量等因素进行引物设计：
Bcl-2：上游引物：5’-TGTGTGGAGAGCGTCAAACC-3’；下游引物：5’-TGGATCCAGGTGTGCAGGT-3’；根据上述引物，采用北京全式金实时定量RT-PCR试剂盒检测Bcl-2的mRNA表达。
2 结果
2.1 苦参碱对HL-60细胞生长抑制率的影响。对照组HL-60细胞生长活跃，而各剂量苦参碱处理组HL-60细胞生长相对缓慢。经MTT比色法测定得出，0.5mg/ml组、1mg/ml组和2mg/ml组测得的吸光度均较对照组显著降低(P<0.01)，表示苦参碱可显著抑制HL-60细胞的增殖。不同浓度苦参碱对HL60白血病细胞增殖有抑制作用，而且这种作用呈时间-剂量依赖关系，随着苦参碱浓度增加或作用时间延长，HL60白血病细胞增殖抑制率增加，详见表1、表2。
与对照组相比，经t检验*P<0.05。
2.2 苦参碱对HL-60细胞凋亡的影响：HL60细胞经0.5、1.0、2.0mg/ml的苦参碱分别作用24、48、72h后，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果显示：在一定的浓度范围内(0.5～2.0mg/ml)苦参碱诱导HL60细胞凋亡的作用随着苦参碱浓度的增加而增强，具有浓度依赖性；随着作用的时间延长苦参碱的诱导凋亡作用也增强 ......
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