人乳头瘤病毒16Ｅ7基因的原核表达及表达条件的优化

http://www.100md.com 2006年8月1日 许蓓妮 刘金花 彭 敏 解庭波 朱丽琴 伍欣星 吴承龙

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    摘要 目的：构建pET—28a(+)—HPVl6 E7原核表达质粒，并对其表达条件进行优化，为进一步研究HPVl6E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法：应用基因重组技术，构建pET-28a(+)与HPVl6 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒，用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定，将其转入宿主菌E.coli BL21(DE 3)进行诱导以表达蛋白；SDS-PAGE及Westernblot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。优化诱导表达的条件，如温度、IPTG浓度、适用的培养基，探讨不同温度下蛋白的表达形式；纯化回收HPVl6 E7蛋白。结果：PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因，其DNA大小、方向、插人位点和阅读框架均正确；HPVl6 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达，最佳表达条件：表达HPVl6 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃，诱导剂IPTG的浓度为0.3—0.4 mmol/L，最佳培养基为1.5倍LB。结论：pET-28a(+)—HPVl6 E7标准株和湖北株重组载体构建成功，人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达。

    关键词 HPV16E基因；重组；原核表达；优化

    中图分类号：Q753

    文献标识码：A

    文章编号：1671—8852(2006)04—0415—06

    http://www.100md.com/html/paper/1671-8852/2006/04/01.htm

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