顾晓群，余黎，武相，白宇，徐奚如，张静，周春梅，张彪

    (1.南京中医药大学附属医院/江苏省中医院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学药学院，江苏 南京 210023)

    阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病[1]，以进行性认知功能减退为主要症状[2]，伴有脑内淀粉样蛋白沉积、神经纤维缠结和神经炎症等病理表现[3]。AD的发病机制复杂，目前尚无公认有效的治疗手段。

    补肾益智方是临床验方，采用补肾活血化痰醒窍法，在干预老年遗忘型轻度认知障碍(Amnestic mild cognitive impairment,aMCI)中取得了较好的临床效果[4]，能够有效改善患者的认知，提高MoCA量表评分及中医症候评分。补肾益智方以枸杞、党参、山萸肉补肾健脾为君，白术、熟地、益智仁健脾益肾为臣，郁金、当归、菖蒲和远志活血化痰为佐，川芎引药上行为使，方中诸药合用使髓海充盈，血脉通畅。本实验利用斑马鱼模型对补肾益智方干预AD的疗效和作用机制进行了研究。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物

    实验用斑马鱼属AB品系，6月龄，购于南京尧顺禹生物科技有限公司。斑马鱼饲养于独立的养殖系统中，每缸放置斑马鱼10～12条，水温26～30 ℃，电导率550～580 μS/cm，pH值为7.0～7.5，光照周期为光照∶黑暗=14 h∶10 h，每日定时喂食丰年虾2次。

    1.2 主要试剂

    六水合氯化铝(AlCl3·6H2O,分析纯,南京化学试剂股份有限公司，批号：160427899D)；盐酸多奈哌齐(北京华威锐科化工有限公司，批号：HW18C2607-2)；补肾益智方饮片(江苏省中医院)；引物(上海生工生物工程股份有限公司)；乙酰胆碱酯酶(ACHE)测试盒、乙酰胆碱转移酶(ChAT)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：20180118，20180122)；反转录试剂盒(Prime Script RT Master Mix)、荧光定量PCR试剂盒(SYBR Premix Ex Tap TM)(爱必梦生物科技有限公司，批号：009983473)；Anti-BACE1 Antibody(Proteintech，批号：00054471)；Anti-APP Antibody(Biorbyt，批号：DF4488)；Anti-Nrf2 Antibody、Anti-Keap1 Antibody(LifeSpan Biosciences ......