赵峻，时磊，张芳

    (1.郑州大学第五附属医院，河南 郑州 450052；2.南京中医药大学药学院，江苏 南京 210023)

    天花粉蛋白(Trichosanthin，TCS)一直以来多用于临床妇科疾病的治疗，如宫外孕、葡萄胎、早或中期妊娠的引产等。TCS是从葫芦科植物的块栝楼根中分离纯化得到的一种碱性蛋白，属于Ⅰ型核糖体失活蛋白。TCS成熟肽由247个氨基酸残基组成，分子量约24 000，pI=9.4，为不含糖的单链核糖体失活蛋白[1]。TCS可迅速引起胎盘的滋养层细胞变性坏死，坏死细胞的崩解碎片充斥在绒毛间隙，导致血液循环障碍，然后加速绒毛组织退化坏死，造成胎儿死亡；同时，TCS引起的滋养叶细胞坏死，导致人体绒毛膜促性腺激素(HCG)和甾体激素迅速降低，绒毛及蜕膜组织变性及进一步坏死，激发内源性前列腺素的合成与释放，继而触发宫缩、诱发流产。另外，TCS具有N2糖苷酶活性，能水解真核细胞核糖体28S rRNA 4 324位上腺苷酸的N-C糖苷键，使核糖体不可逆失活，从而抑制蛋白质的合成。TCS的应用范围已涉及抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等方面[2-4]。TCS作为一种单链核糖体失活蛋白只有活性链而无细胞结合链，只能选择性地进入病毒感染的异常细胞内，对正常细胞毒性很小，极具临床应用价值。TCS除对多种植物病毒有效以外，体外实验表明它对流感病毒、乙脑病毒、HIV病毒等也有抑制作用[3]。

    TCS的作用靶点尚不清楚，本实验以TCS为噬菌体筛选的底物，筛选TCS的结合肽，并通过蛋白质同源性分析寻找其在体内的潜在靶点，为TCS分子作用机制的进一步研究和临床应用提供依据。

    1 材料

    1.1 试剂、载体及菌株

    IPTG/Xgal/四环素(上海生工生物工程有限公司，批号：171104/160923/170512);TCS原料药(上海金山制药有限公司，批号：170106);E.coliER2738(NEB试剂盒)；噬菌体随机十五肽库为本实验室制备并保存；VCS-M13辅助噬菌体为本实验室保存。

    1.2 仪器

    酶标仪(Thermo公司)；摇床，PCR仪(德国eppendorf公司)；Tanon 2500凝胶成像仪(上海天能科技有限公司)；EPS 300电泳槽(上海天能科技有限公司)；ZHWY-211B摇床(上海智城分析仪器制造有限公司)；GSP-9080MBE隔水恒温培养箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；冷冻离心机(美国Thermo公司)。

    2 方法 ......