张正光，刘冰，梁炜锋，沈存思

    (1.南京中医药大学医学院·整合医学学院，江苏 南京 210023;2.南京中医药大学附属医院，江苏省儿童呼吸疾病(中医药)重点实验室，江苏 南京 210029)

    肝癌是我国乃至世界范围内常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的健康与生存[1]。由于肝癌发病隐匿，许多肝癌患者在确诊时已处于晚期，失去了手术治疗的最佳时段,即便进行手术治疗，也难以取得良好治疗效果。索拉非尼(Sorafenib)是目前临床上用于治疗晚期肝癌、肾癌的一线药物[2-4]，是一种新型多靶点抑制剂。然而，Sorafenib的获得性耐药现象在临床上普遍存在，使其应用受到了极大限制[5]。因此，如何降低Sorafenib的耐药性，是医药界治疗中晚期肝癌亟待解决的问题。

    槐耳颗粒由真菌类中药槐耳经过现代技术工艺加工研制而成，具有扶正固本，活血消癥的功效，常被用于不宜手术的原发性肝癌的治疗，对化疗药起着增效减毒的作用[6-7]。近年来研究发现，槐耳颗粒与Sorafenib联合用药相比单用Sorafenib治疗晚期肝癌，其临床疗效有较大的提升，同时腹泻、皮疹、恶心呕吐等不良反应有所改善，差异具有统计学意义[8]。此外，有相关研究发现，槐耳具有部分逆转诸如乳腺癌、肺癌、肝癌等癌症多药耐药的功效[9-11]。然而，槐耳颗粒是否能够逆转肝癌细胞对Sorafenib的获得性耐药，目前尚无文献报道。本文通过初步探究槐耳颗粒对Sorafenib耐药肝癌细胞BEL-7402/S的影响，为槐耳颗粒的临床使用提供一定的研究基础。

    1 材料

    1.1 细胞及药物

    BEL-7402细胞购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；Sorafenib购于北京索莱宝生物科技有限公司(纯度:99%)；槐耳颗粒购于启东盖天力药业有限公司。

    1.2 试剂

    RPMI-1640培养液(上海源培生物科技有限公司)、胎牛血清(Gibco公司)、磷酸盐缓冲液(PBS，pH=7.4)(上海源培生物科技有限公司)、0.25%胰蛋白酶EDTA溶液(上海源培生物科技有限公司)、青霉素-链霉素双抗(100×)(上海源培生物科技有限公司)、CCK-8(DOJINDO公司)、DMSO(BIOSHARP公司)、TRIzol?Reagent(Ambion公司)、5×All-In-One RT MasterMix(Abm公司)、EvaGreen 2× qRCR MasterMix(Abm公司)、RIPA裂解液(Beyotime公司)、ELC化学发光超敏显色试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型 ......