宁青，刘中秋，韦英杰,胡明

    (1.广州中医药大学国际中医药医学转化研究所，广东 广州 510006；2.江苏省中医药研究院，国家中医药管理局中药释药系统重点研究室，江苏 南京 210028)

    补骨脂是具有补肾壮阳、温脾止泻之效的传统中药，临床应用广泛，2015年版《中国药典》收载含补骨脂的成方制剂达41种[1]。随着补骨脂及其制剂的广泛应用，临床上陆续出现肝损伤病例报道[2-4],其潜在肝毒性风险逐渐显现。国家药品监督管理局已先后通报了含补骨脂的制剂导致肝损伤的不良反应[5-7]。在2017版《医保目录》中也报道了含补骨脂的中成药导致的42例肝损伤病例[8]。早在2009年Cheung等[9]报告指出3例急性肝炎患者均使用补骨脂注射剂或含有补骨脂的方剂，提出补骨脂素及其相关化学品可能导致肝毒性，并指出与其他草药同煎可能会导致较高浓度的有毒成分和更严重的肝损伤。补骨脂化学成分复杂，主含香豆素类、黄酮类和补骨脂酚等成分，其中补骨脂素是补骨脂中主要活性成分，亦被认为是主要的毒性成分。

    王永炎和张伯礼提出了以组分配伍研制现代中药的有效组分配伍研究新策略[10]，中药配伍减毒是方剂的特色优势，是中医方剂理论的重要组成部分之一，对临床合理用药有重要指导意义。配伍减毒也是最常用的减毒方法之一，其现代研究是国家中医药现代化发展战略的重要研究内容[11]。如何科学合理地进行配伍减毒研究是目前大家都较为关注的问题。现有体内外毒性评价法均存在相应弊端：体内毒性实验周期长、成本高、化合物用量大，难以进行大规模高效的毒性筛选；体外细胞实验快速，但实验结果常常与体内实验有较大差别。在此基础上，本文尝试采用斑马鱼在体模型进行补骨脂配伍减毒筛选研究。斑马鱼是近年来进行药物在体高通量筛选、毒性和代谢等研究的热门模式生物[12-14]。斑马鱼毒性评价法已在国内外广泛用于药物的安全性评价[15-16]。本文以补骨脂素为目标毒性成分，研究临床不同药味配伍补骨脂素的变化来快速筛选目标减毒药味及成分，并从转录组水平揭示桃叶珊瑚苷配伍补骨脂素减毒的分子机制。

    1 材料

    1.1 实验动物

    实验用斑马鱼成鱼(南京尧舜禹生物科技有限公司)为德国Tuebingen品系斑马鱼，胚胎的繁殖以自然成对交配的方式进行。在(28±0.5)℃条件下用养鱼用水孵育胚胎(养鱼用水水质:每1 L反渗透水中加入200 mg速溶海盐，电导率为450～510 μS/cm，pH为6.9～7.2)。

    1.2 药品与试剂

    1.2.1 试剂 补骨脂素购自国家食品药品检定研究院(Psoralen ......