徐疏影，李文倩，洪浩，蔡云，吴旭，朱冰梅，彭拥军

    (1.南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210029；2.四川大学华西医院，四川 成都 610041；3.南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院，江苏 南京 210023)

    脑缺血是由大脑局部供血不足引起，继发各种病理生理变化的一种常见神经系统疾病，具有高发生率、高致残率及高死亡率的特点，严重危害患者的健康及生活质量[1-2]。脑缺血再灌注损伤是指脑血流中断后再次灌流至脑缺血半暗区，在挽救濒死神经细胞的同时，对其产生迅速的级联反应损伤，最终导致神经细胞的凋亡或坏死，进一步加重脑组织损伤[3-4]。有研究证明，在再灌注阶段，细胞自噬参与调控了神经细胞的损伤与凋亡[5]。针灸被广泛用于干预脑缺血的发生发展期[6],然其治疗机制尚不明确。因此本研究拟通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，探讨电针对大鼠神经细胞的保护作用与细胞自噬的关联性，以期探究电针的保护机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 SPF级雄性SD大鼠，6～8周龄，体质量250～280 g，共72只(重庆威斯腾生物科技有限公司)。动物自购回后保持动物房12 h/12 h昼夜交替，保持动物自由饮水、进食，温度23～25 ℃，适应性喂养1周后进行实验。

    1.1.2 主要试剂与仪器 TTC溶液(Sigma公司，美国)；苏木素染液(南京建成生物工程研究所)；伊红染液(上海碧云天生物公司)；LC3-Ⅱ、Beclin1兔来源单抗(Abcam，英国)；山羊抗兔IgG二抗(Sigma，美国)；G6805-Ⅱ型电针治疗仪(上海医疗电子仪器有限公司)；RNA提取试剂盒(Takara，日本)；Tanon-1600凝胶成像系统(上海天能科技有限公司)；倒置显微镜(Olympus，日本)；照相系统(Olympus，日本)；PTC-100 PCR仪(Bio-Rad，美国)。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组与造模 将72只大鼠采用随机数字法分为对照组、模型组和电针组，每组24只。对照组大鼠不作任何处理。参照Longa线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉(MCA)，建立改良的急性局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO)[7]。大鼠称质量，7%水合氯醛(每100 g体质量给予0.5 mL)腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧位放置于操作台上 ......