高通量测序技术研究附子理中丸对脾阳虚IBS-D大鼠肠道菌群的影响
造模,1材料,1药材与试剂,2仪器与设备,3灌胃液制备,4实验动物及分组,2方法,1造模与给药,2样品采集与制备,3DNA提取与PCR扩增,4生物信息学分析,5统计学方法,3结果,1脾阳虚IBS
林夏,黄友,杨莎莎,魏馨怡,傅超美,李锐,张臻(西南特色中药资源国家重点实验室,成都中医药大学药学院,四川 成都 611137)
《灵枢》云:“邪在脾胃,则病肌痛。阳气有余,阴气不足,则热中善饥;阳气不足,阴气有余,则寒中肠鸣腹痛。”[1]《素问》曰:“清气在下,则生飧泄。”[2]故脾胃虚弱,中阳不健,脾运化升清功能失司,水谷糟粕混杂而下,则致泄泻。由于现代环境、生活方式、工作节奏的改变,劳倦过度、饮食失节、过食生冷辛辣等现象常见,致使胃肠道疾病在现代疾病谱中占据极其重要的地位。目前最常见的功能性胃肠病是腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D),其以反复发作的腹痛、腹泻、大便溏薄为临床主要表现,该病属于中医泄泻范畴,主要病机为脾阳虚[3-6]。现代医学对IBS-D的发病机制并未完全明确,但大量研究表明IBS-D与肠道菌群紊乱密切相关[7-10]。
肠道菌群可以通过和宿主进行共代谢参与到机体的各项生理活动中,是机体不可缺少的一个“器官”,被称为“人体第二基因组”[11-12]。在长期进化过程中,肠道菌群与宿主形成了能相互交流物质和信息的肠道微生态,肠道微生态紊乱是各种疾病的诱发因素[13-14]。研究发现,IBS-D机体的肠道菌群密集度、多样性明显降低,具体表现有肠杆菌数量升高,乳杆菌、双歧杆菌、类杆菌数量降低[7]。
附子理中丸出自宋代《太平惠民和剂局方》,温中健脾,温肾助阳,多用于脾胃虚寒所致脘腹冷痛,呕吐泄泻,手足不温等症,是治疗脾阳虚泄泻的经典方剂[15]。近年来,附子理中丸常用于IBS-D的临床治疗,且疗效确切[16-18],然而其作用机制尚未完全明确,其对脾阳虚泄泻疾病肠道菌群的影响也未见报道。因此,本文采用高通量测序技术,研究附子理中丸对复合法诱导的脾阳虚IBS-D模型大鼠肠道菌群的影响。
1 材料
1.1 药材与试剂
附子(批号:1804038)、干姜(批号:1806012)、炒白术(批号:1803009)、甘草(批号:1807031)、党参(批号:1806128)、番泻叶(批号:1711080)均购自四川新荷花中药饮片股份有限公司,以上药材由成都中医药大学陈江副教授分别鉴定为毛茛科植物乌头AconitumcarmichaeliiDebx.的子根炮制加工品,姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.的干燥根茎,菊科植物白术AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根茎的炮制加工品 ......
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