杨彬彬,崔宁,王世军

    (1.山东中医药大学健康学院,山东 济南 250355；2.山东中医药大学中医学院,山东 济南 250355)

    黄芪入药始载于《神农本草经》,为蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge.的干燥根,列为上品,在我国已有两千多年的药用历史。黄芪味甘、性温，入肺、脾经,具补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌等功效,适用于肺脾气虚,输布失常,脾失运化,水湿内停之水肿[1-3]。现代药理学研究表明,黄芪含有黄芪多糖、黄芪皂苷、黄芪黄酮等有效活性成分。其中,黄芪多糖的功效主要为增强免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等[4-6]。本课题组前期实验表明,脾虚湿困模型大鼠出现胃肠功能紊乱及小肠黏膜损伤等症状,黄芪多糖可通过调节血清胃泌素、淀粉酶、胆囊收缩素(CCK)、血管活性肠肽(VIP)及尿D木糖排泄率等改善胃肠功能,修复小肠黏膜损伤,但其分子机制尚不清楚[7-8]。因此,本实验通过建立脾虚湿困大鼠模型,进一步观察黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对脾虚湿困大鼠的治疗作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    雄性Wistar大鼠60只,体质量(150±10)g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,实验动物许可证号:SCXK(京)2016-0006。饲养于山东中医药大学实验动物中心,SPF级环境喂养,温度23～25 ℃,相对湿度40%～50%,光照时间7:00—19:00。按照国家部属实验动物管理委员会制订的标准饲养并经山东中医药大学实验动物伦理委员会批准(批号:SDUTCM20201029001)。

    1.2 药物

    黄芪多糖(纯度：90%，Solarbio公司,货号:IA0570),4 ℃保存备用。参苓白术散(山西华康药业股份有限公司,批号:20181204,6 g×8袋)。

    1.3 主要试剂、仪器及饲料

    大鼠D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO) ELISA试剂盒(江苏晶美生物科技有限公司,货号:200107KE6、200107KE7);Wnt1、C-MYC、CyclinD1、β-catenin抗体(Abcam公司,货号:ab15251、ab32072、ab40754、ab32572);β-actin抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司,货号:TA-09);辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司,货号:ZB-2301);qPCR试剂盒、RNA提取试剂盒(TaKaRa公司,货号:DRR420B、D9109);PVDF膜、ECL发光试剂盒(Millipore公司,货号:IPVH00010、WBKLS0500) ......