刘甜甜,卞勇,2,关汉卿,梁研,郭文晖,余倩慧,唐德才

    (1.南京中医药大学中医学院·中西医结合学院,江苏 南京 210023;2.南京中医药大学实验动物中心,江苏 南京 210023)

    转移是恶性肿瘤最显著的生物学特征,也是导致患者死亡的主要原因。血管内皮屏障的通透性与肿瘤转移密切相关[1],肿瘤细胞血行转移过程中需要两次跨越血管屏障(内渗、外渗)进出血液循环系统才能实现远端转移[2],血管内皮通透性的增加为肿瘤跨越血管内皮转移提供了有利条件。紧密连接是由跨膜蛋白[闭合蛋白(Claudin)、咬合蛋白(Occludin)、连接黏附分子(JAM)]、胞质附着蛋白(Zonula occluden,ZO)以及细胞骨架(微丝)等共同组成的复合体[3],是维持血管通透性和机械屏障的重要结构,也是阻碍肿瘤细胞跨血管内皮的重要屏障[4]。研究表明,转移性肿瘤细胞能通过分泌外泌体[5]、生长因子[6]、基质金属蛋白酶[7]等多种因子抑制血管内皮ZO-1、Occludin等紧密连接蛋白的表达,破坏血管内皮间紧密连接，增加血管通透性,进而实现远端转移。

    黄芪、莪术、重楼分别是补气药、活血药、解毒药的代表,常用于肿瘤的治疗。含“黄芪-莪术-重楼”配伍的复方如芪术蚤复方[8]、益气化瘀解毒方[9]、健脾消癌方[10]等均在临床被用于抗肿瘤转移,且能显著抑制肿瘤术后患者的复发转移率,提高生存率。课题组前期研究也表明,黄芪-莪术-重楼配伍可以抑制结肠癌原位移植瘤的生长与转移[11];黄芪-莪术药对配伍不仅可以抑制结肠癌细胞的黏附与迁移[12],还可抑制肿瘤血管新生[13],改善肿瘤血管结构,促进肿瘤血管正常化新生[14]。因此,本研究拟观察黄芪-莪术-重楼配伍在人结肠癌细胞系HCT116跨血管内皮迁移过程中对血管间紧密连接以及血管通透性的影响,探究黄芪-莪术-重楼配伍抑制HCT116细胞血行转移的作用机制,为黄芪-莪术-重楼配伍抗肿瘤转移的临床应用提供依据。

    1 材料

    1.1 实验细胞

    人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)、HCT116均购于中国科学院细胞库。

    1.2 实验动物

    32只4～5周SD雄性大鼠,体质量(200±20)g,购自杭州医学院,合格证号:SCXK(浙)2019-0002。饲养于南京中医药大学实验动物中心SPF级屏障环境,室温(22±1) ℃,湿度为40%～70%,12 h明/暗光照周期,实验期间自由进食和饮水。实验动物环境使用许可证号:SYXK(苏)2018-0049 ......