徐成成,陆艳,唐莉莉,梁艳,赵杨

    (南京市中医院脑病科,南京中医药大学附属南京中医院，江苏 南京 210001)

    帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种常见的神经系统退行性疾病,以中脑黑质多巴胺(Dopamine,DA)能神经元丧失,纹状体中DA含量明显减少以及黑质和蓝斑中存在路易小体(Lewy body,LB)等为主要病理特征,以肌张力增强、运动障碍,同时可能伴有认知能力下降为主要临床症状[1]。据估计,到2030年,我国PD患者将会达到494万,约占全世界患者50%[2]。目前,临床上只能通过外科手术以及左旋多巴类、左旋多巴增效剂、DA受体激动剂和促DA释放类等药物干预来控制PD病情,尚无法根治,且药物短期疗效较好,但长期使用易出现疗效减退现象,寻找更为有效的治疗PD新药尤为迫切[3]。

    PD致病因素较多,发病机制尚不明确,诸多证据表明黑质内DA能神经元退化与线粒体功能障碍和自噬通路功能异常等相关[4],以ROS产生过多、ATP产生减少、线粒体DNA损伤等为主要特征的线粒体功能缺陷在PD发病过程中起着关键作用[5]。同时,线粒体自噬通路的异常,不能及时清除损伤或病变的线粒体,导致线粒体动态性失调,造成PD的发生和发展[6]。

    温肾养肝汤是江苏省名中医赵杨教授治疗PD的经验方,全方由肉苁蓉、乌药、益智仁、淮山药、炒白芍和钩藤6味药组成,临床上具有保护DA能神经元,延缓PD的疗效[7]。前期研究结果也证实,方中君药肉苁蓉能明显升高黑质纹状体中DA及其代谢物含量,下调α-突触核蛋白表达,保护PD模型大鼠的DA能神经元,改善大鼠神经行为学特征[8],但全方治疗PD的作用机制尚不清楚。本研究建立1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致PD小鼠模型,观察温肾养肝汤保护DA能神经元的作用,并从线粒体功能及自噬通路方面探究其分子机制,以期为PD治疗药物开发提供更多科学依据。

    1 材料

    1.1 实验动物

    成年雄性C57/BL6小鼠50只,10周龄,体质量25～30 g,由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供,动物生产许可证号:SCXK(沪)2018-0006。在南京中医药大学动物实验中心适应性饲养(伦理号:202102A002),自由饮水,温度20～25 ℃,湿度40%～70%。适应性饲养1周。

    1.2 药材

    1.2.1 温肾养肝汤处方 肉苁蓉30 g,乌药20 g,益智仁30 g,淮山药20 g,炒白芍20 g,钩藤20 g,按处方量加20倍纯水,煎煮2次,每次1.5 h,浓缩至生药量4 g·mL-1 ......