孟嘉伟,宋囡,王莹,陈丝,王群,赵秋宇,贾连群

    (辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室,辽宁 沈阳 110847)

    近三十年来,中国人的血脂水平逐步升高,显著增加了以血脂异常为基础的心血管疾病的发病率[1]。采取有效的治疗手段将减轻血脂异常引起的相关疾病负担。血脂异常属于中医学“痰湿”“痰浊”“痰瘀” 等范畴。《医宗必读》云:“脾为生痰之源”[2]。可表明脾与膏脂痰湿的生成之间存在着密切关系。脾为升清降浊的重要枢纽。脾虚,意味着脾的运化功能受损,被视为加重血脂异常的关键病机之一[3]。课题组前期在此病机的基础上,选取健脾降浊法作为治疗的主要方法,选取益气化痰,理气畅中的经典方剂香砂六君子汤治疗脾虚高脂血症大鼠。并对香砂六君子汤治疗剂量进行筛选,发现正常剂量(5.67 g·kg-1·d-1)和高剂量(11.34 g·kg-1·d-1)治疗高脂血症效果明显,香砂六君子汤在调节胆固醇逆向转运及纠正失功能高密度脂蛋白等方面疗效显著[4-5]。目前,非编码RNA的深入研究为传统医学开启了疾病防治的新征程。微小核苷酸(miRNAs)作为非编码RNA中重要的一部分,随着相关研究的不断深入,临床和实验研究揭示了miRNAs在肝脂肪变性发生、发展过程中的关键作用[6-8]。环状RNA(CircRNA)可以通过“海绵化”目标miRNA和调节miRNA靶向转录本的表达,在生物过程中起着重要作用[9]。本实验选用高脂血症大鼠探讨香砂六君子汤是否可以通过调控CircRNA-0067835/miR-155，调节高脂血症大鼠过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPARγ)所介导的肝脏胆固醇外排,从而改善高脂血症,为中医药在临床中的作用机制研究提供实验依据。

    1 材料

    1.1 动物

    30只SPF级SD大鼠,8周龄,体质量(190±20) g,由辽宁长生生物科技股份有限公司提供,于辽宁中医药大学实验动物中心单笼饲养,饲养湿度维持40%～70%,温度维持18～22 ℃,采取12 h/12 h模式进行昼夜明暗交替。实验动物许可证号:SCXK(辽)2015-0001。实验动物伦理审查编号:21006092017056。

    1.2 药物

    1.3 主要试剂及仪器

    TC、TG、LDL-C、HDL-C试剂盒(四川迈新生物技术有限公司,批号:CH0103152、CH0105151、CH0105162、CH0105161);苏木素-伊红(HE)染色液(碧云天生物技术有限公司,批号:C0105);反转录试剂盒、qPCR试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司,批号:CW2582M、CW2601M);动物组织总RNA提取试剂盒(成都福际生物技术有限公司,批号:RE-03014);PPARγ、肝X受体(LXR)、腺苷三磷酸结合盒转运体G1(ABCG1)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(美国Proteintech公司,批号:16643-1-AP、14351-1-AP、13578-1-AP、10494-1-AP);腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)抗体(美国Immunoway公司,批号:YN2847) ......